2026版高中汉水丑生生物-选3第三章第2节：基因工程的基本操作程序（第1课时：PCR、电泳）.pptxVIP

3.3.2基因工程操作的基本程序

3.3.2基因工程操作的基本程序第1课时：PCR和电泳

一、PCR的原理二、PCR的应用三、电泳的原理和应用PCR和电泳汉水丑生作品（QQ

PCR的全称是_________________，是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。细胞内DNA复制的时候，解旋是靠__________完成的，合成DNA子链时要用到DNA聚合酶。DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从3’端延伸DNA链，因此DNA复制需要______，其作用是_________________________。ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC5’3’TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG3’5’GGAUCG5‘AUCGCG5‘RNA引物ⅠRNA引物ⅡTAGCGCTATCGCATCGACGCT3’ATAGCGTAGCTGCGAGGATCG3’聚合酶链式反应解旋酶引物给DNA聚合酶提供3’端

3′5′DNA聚合酶不能将单个的核苷酸链连接成链，因此子链合成需要引物（最初的已有链）。DNA聚合酶3′5′模板链DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有链的3′-端，即子链的延伸方向是5′→3′。

PCR技术中，解开双链没有用解旋酶，而是利用的DNA的热变性和复性的原理。变性：在80-100℃的温度范围内，DNA的双螺旋结构将解体，双链分开复性：当温度缓慢降低后，两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链PCR技术中使用的DNA聚合酶是能够耐高温的Taq酶（在70℃反应2h后其残留活性大于原来的90%，在95℃下反应2h后其残留活性是原来的40%）。

变性：当PCR反应体系的温度设定为95℃时，模板DNA的氢键被破坏，模板DNA变为单链；复性（退火）：当PCR反应体系的温度降为55℃时候，碱基互补的DNA片段之间会自发形成氢键，恢复双链结构。此时会有一些引物片段与单链模板DNA结合，为Taq酶提供3’。延伸：此后将PCR反应体系的温度升高为72℃，Taq酶沿着引物3’扩增DNA。

925575℃3`5`5`3`将模板DNA、4种脱氧核苷酸（dATP、dTTP、dGTP、dCTP）、Taq酶、过量的2种引物、Mg2+加入缓冲溶液中。引物1引物2原料模板DNA目的基因Taq聚合酶

925575℃变性3`5`5`3`

925575℃退火思考、引物为何会结合在图中所示位置？

925575℃延伸

925575℃变性

925575℃退火

925575℃延伸

925575℃变性

925575℃退火

925575℃延伸

第1次扩增长链-中长链DNA____个含有引物A的DNA____个含有引物B的DNA____个211

第2次扩增中长链-短链DNA____个长链-中长链DNA____个含有引物A的DNA____个含有引物B的DNA____个2233

第3次扩增短链-短链DNA______个中长链-短链DNA____个长链-中长链DNA____个含有引物A的DNA____个含有引物B的DNA____个24277

第4次扩增短链-短链DNA______个中长链-短链DNA____个长链-中长链DNA____个含有引物A的DNA____个含有引物B的DNA____个2681515

20022240226822(n-1)2n-2n137152n-12×2n-22

3`5`5`3`思考、如果两种引物结合在模板DNA的一条链上，扩增结果如何？

ABCDEABCDEABCDEACBCDEAD引物丙引物乙引物甲

ABCABCDEABCDEAC引物丙引物乙引物丙引物乙BCAABCBCA引物丙引物乙

ABCDEABCDEACBCDEAD引物丙引物乙引物甲BCDEAC引物乙

BCDEADBCDEAC引物乙引物甲引物甲引物乙引物乙引物甲BCEADDC

PCR技术扩增目的基因如果目的基因的核苷酸序列未知，但知道目的基因两端的部分_____________，就可以设计合适的______，利用PCR技术大量扩增出目的基因。核苷酸序列引物PCR反应需要在一定的______溶液中进行，需提供：____________、_______________（dATP、dTTP、dGTP、dCTP）、________和_________________，同时控制温度使DNA复制在体外反复进行。PCR一般要经历三十多次循环，每次循环可分为______、______和______。控制的温度分别是______、______和______。缓冲DNA模板4种脱氧核苷酸两种引物耐高温的DNA聚合酶变性复性延伸95℃55℃72