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EB病毒重组壳抗原表达及其在鼻咽癌精准检测中的创新应用研究

一、引言

1.1研究背景

鼻咽癌（NasopharyngealCarcinoma,NPC）是一种起源于鼻咽黏膜上皮的恶性肿瘤，严重威胁人类健康。在全球范围内，鼻咽癌的发病率存在明显的地域差异，中国南方地区，如广东、广西、福建等地，是鼻咽癌的高发区，其中珠三角地区发病率居世界之首，因此鼻咽癌又被称为“广东癌”。据统计，过去15年里，鼻咽癌的发病率与死亡率一直居高不下。

鼻咽癌的早期症状不明显，缺乏特异性，如鼻塞、鼻出血、耳鸣、听力下降等，这些症状容易被忽视或误诊为其他常见疾病，如鼻炎、中耳炎等。当患者出现明显症状就医时，往往已处于中晚期。临床调查显示，I～IV期鼻咽癌患者的5年生存率分别为95%，78%，49%和23%，早期诊断和早期治疗能使70%以上的肿瘤病人得到完全控制。然而，目前临床确诊的鼻咽癌病例多为中晚期患者，其中I～IV期的组成比分别为9%、13%、50%、22%。因此，寻找一种有效且易于广泛开展的实验室诊断方法，对于提高鼻咽癌的早期检出率及5年生存率具有重大意义。

自1966年从鼻咽癌患者血液中检测到EB病毒（Epstein-Barrvirus,EBV）抗体，1969年由鼻咽癌活检组织培养出的类淋巴母细胞中分离到EBV以来，大量研究结果已证实，EBV是鼻咽癌的重要诱发因子。EBV是一种普遍存在的人类疱疹病毒，属DNA肿瘤病毒类，分为A、B两型。该病毒主要通过唾液传播，在体内感染B淋巴细胞和上皮细胞，并能刺激受感染细胞持续性生长，从而引起细胞无限制传代达到“永生”。除了鼻咽癌，与EB病毒感染相关的恶性肿瘤还包括伯基特氏淋巴瘤、何杰金氏病、非何杰金氏淋巴瘤等。

进一步研究发现，EBV感染与鼻咽癌的发生发展密切相关。在鼻咽癌细胞中，EBV的基因可整合到人宿主细胞基因组，从而诱发癌细胞恶性转化，导致肿瘤发生。EB病毒相关标志物的检测有助于鼻咽癌的早期诊断，在鼻咽癌细胞中的EB病毒的裂解，其成分释放出现在患者的血浆和血清中，或引起机体免疫反应导致其抗体浓度明显升高。EB病毒相关标志物在鼻咽癌患者和非鼻咽癌患者之间具有显著差异，而且在进展期鼻咽癌患者中其浓度明显高于无进展的患者，在肿瘤复发的鼻咽癌患者中，EBV-DNA检测的阳性率明显高于无复发患者。一般认为，在NPC患者的血浆或血清中EB病毒相关抗体或DNA可以作为鼻咽癌的肿瘤标记物，不仅有助于鼻咽癌的诊断，还可以反映出疾病的进程和预后。

EB病毒的衣壳抗原（VCA）、早期抗原（EA）、核抗原（EBNA）等相关抗体浓度的检测均有利于指导鼻咽癌的诊断、治疗和预后。其中，VCA-IgA抗体的检测有助于筛选早期的鼻咽癌患者，其敏感性较高，鼻咽癌患者血清VCA-IgA阳性率达94%；而EA-IgA抗体在鼻咽癌的诊断中比VCA-IgA的特异性更高，更有早期诊断价值；同样EBNA的浓度检测也有利于鼻咽癌的诊断和预后。EB冰冻抗体滴度随病情变化而改变，如癌肿进展、复发或转移则其抗体滴度上升。

目前常用的EB病毒免疫学检测方法有免疫荧光法（Fluoroimmunoassay,FIA）、免疫酶法（Immunoenzymaticassay,IE）和酶联免疫吸附分析法（Enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）等。然而，前二者因操作繁琐、特异性差且需特殊仪器及结果读取存在主观影响所致差异等缺点，不适用于广泛筛查工作。此外，目前针对EB病毒血清学免疫检测的试剂盒中，尚无敏感性与特异性均可较好兼顾者。因此，开发一种高敏感性和特异性的EB病毒检测方法，对于鼻咽癌的早期诊断和防治具有重要的临床意义。

本研究选择EB病毒壳抗原片段作为检测目的片段，通过基因重组技术对其进行重组表达，进而用于血清学检测。旨在通过目的基因载体构建与表达，获得敏感性与特异性良好且来源稳定的抗原，应用于鼻咽癌相关抗体的检测，为鼻咽癌的早期诊断提供新的方法和思路。

1.2研究目的与意义

本研究旨在通过基因重组技术表达EB病毒重组壳抗原，并将其应用于鼻咽癌的检测中，以期为鼻咽癌的早期诊断提供一种新的、更为有效的方法。

鼻咽癌的早期诊断对患者的治疗和预后至关重要。目前，临床确诊的鼻咽癌病例大多处于中晚期，这严重影响了患者的5年生存率。EB病毒与鼻咽癌的发生发展密切相关，EB病毒相关标志物的检测有助于鼻咽癌的早期诊断。然而，现有的EB病毒免疫学检测方法存在操作繁琐、特异性差等缺点，且针对EB病毒血清学免疫检测的试剂盒在敏感性与特异性方面难以兼顾。

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