细胞工程第四章细胞培养.pptVIP

6.*第30页，共83页，星期日，2025年，2月5日7.*第31页，共83页，星期日，2025年，2月5日4.2.2细胞培养基*第32页，共83页，星期日，2025年，2月5日营养需要基本营养物质：包括氨基酸、维生素、碳水化合物及一些无机离子。促生长因子：体外培养细胞既需要上述基本营养物质，还需要促细胞生长因子等物质才能正常生长、繁殖。血清中含有多种这类物质，有利于多数细胞的存活和生长。RPMI-1640培养液10~20%FBS*第33页，共83页，星期日，2025年，2月5日4.2.1细胞培养基细胞培养基组成培养基（培养液）是维持体外细胞生存和生长的溶液分为天然培养基和合成培养基。第34页，共83页，星期日，2025年，2月5日1.培养基培养基（培养液）是维持体外细胞生存和生长的溶液，分天然培养基和合成培养基。天然培养基：天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。优点：营养成分丰富，培养效果好。缺点：来源受限。成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析。易发生支原体污染。*第35页，共83页，星期日，2025年，2月5日合成培养基合成培养基是根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。目前已设计出许多种培养基，如TC199、MEM、RPMI-1640、DMEM等。合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。优点：标准化生产，组分和含量相对固定。成本低。缺点：缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。第36页，共83页，星期日，2025年，2月5日基本培养基的种类P252附表4MEMDMEMIMDMRPMI1640M199、M109HamF12McCoy’5A*第37页，共83页，星期日，2025年，2月5日*第38页，共83页，星期日，2025年，2月5日第39页，共83页，星期日，2025年，2月5日4.2.2培养基的配制（1）基础培养基的配制仔细阅读说明书配制要保证充分溶解配制所用水应为超纯水*第40页，共83页，星期日，2025年，2月5日合成培养基（粉）1袋碳酸氢钠2.0g青、链霉素各100单位／毫升加三蒸水至1000ml过滤除菌，调节pH值至7.2基础培养基的配制*第41页，共83页，星期日，2025年，2月5日基础培养基80％一95％血清5％一20％（2）完全培养基－有血清培养基的配制*第42页，共83页，星期日，2025年，2月5日人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。血清中含有：①多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等）；②多种金属离子；③激素；各种生长因子；④促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等；⑤胰酶抑制因子；⑥转移蛋白；⑦不明成分。血清*第43页，共83页，星期日，2025年，2月5日一般说来，含5％小牛血清的培养基对大多数细胞可以维持细胞不死，但支持细胞生长一般需加10％血清。对于血清支持细因生长的生物学效应已得到证明，但对血清中的复杂成分至今尚未完全清楚。血清中不仅存在促细胞生长因子，同对也存在细胞生长抑制因子或毒性因子，因此在含血清培养基中培养的细胞所反映的生物学特性是细胞和复杂血清因子的综合反应。在生长因子、蛋白质工程、基因表达调控等研究领域，迫切需要用无血清培养基培养细胞。血清的作用*第44页，共83页，星期日，2025年，2月5日血清质量好坏是实验成败的关键。常用血清有胎牛血清、新生牛血清、小牛血清、兔血清、马血清等，其中以胎牛血清质量最好。优质血清的标准：透明，淡黄色，无沉淀物，无细菌、支原体、病毒污染。血清的灭活（消除补体活性）：56℃，30分钟。血清的消毒：过滤除菌。血清的使用*第45页，共83页，星期日，2025年，2月5日2.培养基的配制（3）无血清培养基基础培养基＋添加成分*第46