植物组织培养原理.pptVIP

************************

2、体细胞胚胎发生机理：体胚具有两个明显特点：极性和生理隔离极性：单个胚性细胞第一次分裂多为不均等分裂，顶细胞继续分裂形成多细胞原胚，基细胞进行少数几次分裂形成胚柄。极性获得的诱因是激素和外界刺激。 生理隔离：在早期胚性细胞与周围细胞存在胞间连丝，但是随着胚性细胞的发育，细胞壁加厚，胞间连丝消失或被堵塞（类似小孢子发生）。第62页，共69页，星期日，2025年，2月5日第63页，共69页，星期日，2025年，2月5日第64页，共69页，星期日，2025年，2月5日3、体细胞胚胎发生过程中的的生理生化：（1）蛋白质与核酸代谢；（2）多胺代谢变化；（3）糖类、矿质营养变化；（4）内源激素变化；（5）活性氧代谢变化。第65页，共69页，星期日，2025年，2月5日第四节影响植物离体形态发生的因素一、植物种类和基因型1、植物种类不同难易程度不同；被子植物比裸子植物容易。2、同一物种不同基因型间存在较大差别。二、培养材料的生理状态1、发育年龄：一般幼态比老态组织形态发生能力高；2、培养器官或组织类型：细胞分裂旺盛的器官较好；3、培养时间和细胞倍性：一般取处于旺盛生长期的愈伤来诱导器官形成；花药培养（单倍体花粉细胞与二倍体花药）。第66页，共69页，星期日，2025年，2月5日三、培养基1、营养成分 一般认为，培养基中的铵态氮和K+有利于胚状体形成，提高无机磷的含量可促进器官发生。 茎尖培养和芽诱导培养基主要是MS及其修改的培养和B5培养基。 茎尖培养的起始培养基和芽增殖的培养基往往是不同。碳水化合物种类及浓度对胚状体发育有重要作用。缺糖或低糖无法形成胚状体。第67页，共69页，星期日，2025年，2月5日2.植物激素及生长调节剂

（起主导作用，通过影响内源激素的平衡起作用）（1）生长素：促进外植体生长、生根，并与细胞分裂素共同诱导不定芽分化及侧芽萌发与生长。2，4–D诱导体细胞胚胎发生。（2）细胞分裂素：促进分化和芽形成，抑制根发育及衰老。（3）赤霉素：GA3促进茎的伸长，打破休眠，对芽的诱导和形成有促进作用。（4）乙烯：对芽的诱导和形成有促进或抑制作用（5）脱落酸：对体胚的发生及成熟很重要，可增加胚性愈伤组织的形成和体胚发生。第68页，共69页，星期日，2025年，2月5日3、培养基的物理性质（1）愈伤组织诱导：在固体培养基上（胡萝卜、石刁柏）。（2）细胞和胚状体的诱导：在液体培养基上。（3）pH显著影响芽的生成（pH=5.8）（4）诱导胚状体发生或早期胚状体培养：渗透压，前低（2%）后高（5%）.第69页，共69页，星期日，2025年，2月5日************************植株水平的再分化（植株再生）：根、茎或芽器官的发生可使植株重建。先诱导分化出芽，后形成根较好。离体培养中再生植株的主要途径有：器官发生胚胎发生第30页，共69页，星期日，2025年，2月5日2、影响细胞再分化因素：从理论上讲，在离体培养条件下经过再分化可获得各种类型的细胞、组织、器官以及再生植株。但是目前，还不能让所有植物的活细胞都再生植株。主要原因是：（1）不同植物种类再分化的能力差异很大；（2）对某些植物再生条件还没有完全掌握。第31页，共69页，星期日，2025年，2月5日三、愈伤组织（callus）培养１、愈伤组织的形成在细胞脱分化过程中，大多数情况下形成愈伤组织。愈伤组织的细胞往往是异质性的，无明显极性，其形成过程可分为诱导期、分裂期和分化期。 第32页，共69页，星期日，2025年，2月5日愈伤组织（callus）原指植物体的局部受到创伤刺激后，在伤口表面新生的组织。它由活的薄壁细胞组成，可起源于植物体任何器官内各种组织的活细胞。第33页，共69页，星期日，2025年，2月5日黄瓜子房组织经脱分化形成胚性愈伤组织第34页，共69页，星期日，2025年，2月5日第35页，共69页，星期日，2025年，2月5日诱导期（起动期）：是细胞准备分裂的时期。细胞大小几不变，内部发生生理生化变化，迅速合成蛋白质和核酸。分裂期：外层细胞分裂，中间细胞常不分裂，形成小芯。细胞分裂快，结构疏松，缺少结构，浅而透明。在原培养基上，细胞必分化，及时转移，其可无限制地进行细胞分裂，维持不分化状态（愈伤的继代）。分化期