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随着磷酸二酯酶的增加，能量转移荧光峰降低。***生物活性自由基是指生理或病理过程涉及的自由基。生命过程中所产生的自由基，是行使生理功能及介导其生化反应所必需的。如在线粒体呼吸链上电子传递过程中产生的自由基在线粒体能量代谢中起着重要的作用。*****脱氧胸腺嘧啶核苷二聚体，分别连接能量给体（荧光素）和能量受体（罗丹明）。羟基自由基作用前，测得能量转移荧光，羟基自由基作用后，磷酸连接体断裂，能量转移荧光消失。*Fura-2andindo-1(FuraandIndoRatiometricCalciumIndicators)areUVlight–excitable,ratiometricCa2+indicatorsthataregenerallyconsideredtobeinterchangeableinmostexperiments.Fura-2hasbecomethedyeofchoiceforratio-imagingmicroscopy(),inwhichitismorepracticaltochangeexcitationwavelengthsthanemissionwavelengths.UponbindingCa2+,fura-2exhibitsanabsorptionshiftthatcanbeobservedbyscanningtheexcitationspectrumbetween300and400nm,whilemonitoringtheemissionat~510nm(Figure19.3).Incontrast,indo-1isapreferreddyeforflowcytometry,whereitismorepracticaltouseasinglelaserforexcitation—usuallythe351–364nmspectrallinesoftheargon-ionlaser—andmonitortwoemissions.Theemissionmaximumofindo-1shiftsfrom~475nminCa2+-freemediumto~400nmwhenthedyeissaturatedwithCa2+(Figure19.4).***False-colorimage（假色成像）offreeCa2+concentrationinaPurkinjeneuron（梨状神经元）fromembryonicmousecerebellum（胚鼠小脑）.Neuronsweregrownindispersedtissueculturefor12days,loadedwiththepentapotassiumsaltoffura-2(F1200)usingamicroelectrodeandthenchallenged（活化）withtrans-ACPD,anagonist（兴奋剂）ofmetabotropicglutamatereceptors,intheabsenceofextracellularCa2+.Thecompositeimage,whichrepresentstheratioofimagesobtainedwithexcitationat340nmand380nm,revealsthemobilizationofinternalCa2+storeswithoutcontributionfromCa2+influx.TheimagewascontributedbyD.J.Linden,JohnsHopkinsUniversity,andM.SmeyneandJ.A.Connor,RocheInstituteofMolecularBiology.**CA1pyramidalneuron（锥形神经元）inahippocampalslice（海马切片）filledwithSBFIdeliveredfromapatchpipette(visibleontheright).Theimagewasobtainedusingt
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