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基因扩增基础知识培训课件

汇报人：XX

目录

01

基因扩增概述

02

PCR技术详解

03

实时定量PCR

04

基因扩增的应用

06

基因扩增实验安全

05

基因扩增实验设计

基因扩增概述

PART01

基因扩增定义

基因扩增概念

指特定基因拷贝数选择性增加

天然与人工扩增

天然：DNA复制错误等；人工：PCR等技术

基因扩增原理

通过热力变性处理，引物结合DNA，DNA聚合酶延伸新链。

DNA链复制

体内基因复制，体外常用PCR，实现DNA片段拷贝数增加。

体内体外扩增

常用扩增技术

PCR技术

通过DNA复制，快速扩增特定DNA片段。

LCR技术

结合DNA聚合酶和连接酶，扩增核酸探针。

PCR技术详解

PART02

PCR技术原理

PCR技术体外扩增特定DNA片段，类似DNA天然复制。

体外酶促扩增

变性、退火、延伸循环，使DNA片段指数级扩增。

主要过程

PCR实验步骤

加热解旋DNA双链

变性

引物与DNA单链结合

退火

延伸

合成新DNA链

PCR常见问题

退火温度过高或过低均影响PCR扩增效果。

退火温度

引物设计不当影响扩增效率和特异性。

引物设计

样本或试剂污染导致假阳性结果。

污染问题

实时定量PCR

PART03

实时定量PCR原理

利用荧光染料或探针，实时监测PCR扩增中的荧光信号变化。

荧光信号监测

荧光强度与产物量成正比，通过Ct值计算初始模板浓度。

荧光强度定量

实验操作流程

01

样本准备与配样

提取RNA，反转录成cDNA，配制反应体系。

02

PCR循环反应

变性、退火、延伸，实时监测荧光信号。

03

数据分析

根据溶解曲线，导出并分析qPCR数据。

数据分析方法

通过制作标准直线，根据Ct值计算样品模板量。

标准曲线法

用管家基因校正误差，均一化转换目标基因测定结果。

内标基因法

基因扩增的应用

PART04

病原体检测

基因扩增技术快速诊断感染性疾病，提高诊断准确性。

医学诊断

在DNA鉴定和亲子鉴定中，扩增微量DNA样本进行分析。

法医学应用

基因表达分析

基因扩增助力基因表达分析，揭示疾病机制。

医学研究

在科研中，基因扩增技术用于基因表达分析，推动生命科学进展。

科研探索

遗传病诊断

基因扩增技术用于遗传病基因检测，准确查找致病基因。

遗传病检测

通过基因扩增技术，实现遗传病携带者检出和产前诊断。

产前诊断

基因扩增实验设计

PART05

实验设计原则

区域独立性

各实验区域物理隔离，防止交叉污染。

试剂引物准备

确保试剂、引物质量，准备充分。

引物设计要点

01

引物长度适中

长度18-24bp，保证特异性及退火效果。

02

Tm值接近目标

Tm值58-62℃，上下游接近，确保特异性结合。

03

GC含量均衡

GC含量40%-60%，避免非特异性扩增。

实验条件优化

优化变性、退火、延伸温度，确保扩增效率与特异性。

温度参数调整

01

合理设计引物长度、序列及GC含量，避免非特异性扩增。

引物设计规范

02

基因扩增实验安全

PART06

生物安全等级

二级实验室需进行个人防护，操作需在生物安全柜内进行。

BSL-2实验室要求

包括工程控制、行政管理控制和个人防护装备。

风险控制措施

实验室安全操作

进入实验室需穿戴手套、口罩等防护装备。

穿戴防护设备

实验室内严禁进食、饮水和吸烟，保持环境整洁。

禁止饮食吸烟

废弃物需按规定分类处理，防止交叉污染和环境污染。

规范处理废弃物

废弃物处理规范

按废弃物类别分类，避免交叉污染。

分类收集储存

委托专业单位合规处置，确保安全。

专业处理

谢谢

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