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赖氨酸发酵工艺及控制要点(8)生物素对赖氨酸生物合成的影响?在以葡萄糖,丙酮酸为唯一碳源的情况下,添加过量生物素(200~500μg/L),赖氨酸积累量显著增加。因为生物素量增加,促进了草酰乙酸的合成,增加了天冬氨酸供给。生物素对赖氨酸生物合成的影响(续)另一方面,过量生物素使细胞内合成的谷氨酸对谷氨酸脱氢酶起反馈抑制作用,抑制谷氨酸的大量合成,使代谢流转向合成天冬氨酸的方向进行。赖氨酸发酵工艺及控制要点(9)硫酸铵对赖氨酸发酵的影响?硫酸铵对赖氨酸发酵影响很大。当硫酸铵含量大时菌体生长迅速,使赖氨酸产量低。但在无其他铵离子情况下,用量为4.0%~4.5%时赖氨酸产量最高。6.赖氨酸的提取和精制赖氨酸的提炼过程包括:发酵液预处理提取精制6.1赖氨酸发酵液的主要性质赖氨酸发酵液由于所用的原料、培养基组成及浓度、菌种和发酵工艺不同,其组成也不同,一般由以下四部分组成:氨基酸、菌体、培养基残留物、(1)氨基酸氨基酸代谢主产物赖氨酸,含量为7~8g/L;少量其他氨基酸,如缬氨酸,丙氨酸和甘氨酸,当发酵不正常时含有谷氨酸;少量有机酸,特别是发酵工艺控制不好时,含有乳酸。(2)菌体菌体一般含量在15~20g(干重)/L。(3)培养基残留物培养基残留物如残糖6~20g/L(随原料不同而异),无机离子(如NH4+、Ca2+、Mg2+、K+和一些阴离子,其中NH4+浓度较高)。(4)色素色素发酵液中的这些杂质对赖氨酸的提取和精制影响很大,特别是菌体和钙离子等,应尽量除去。6.2发酵液的预处理发酵液的预处理,包括除菌体和影响提取收率的杂质离子。去除菌体的方法有离心分离法和添加絮凝剂沉淀两种方法。离心分离法采用高速离心机分离除去,如菌体体积小时需反复分离,成本高。添加絮凝剂沉淀法是先将发酵液调节到一定的pH值,加适宜絮凝剂如聚丙烯酰胺,使菌体絮凝而沉淀,加助滤剂过滤出去。发酵液的预处理(3)钙离子一般通过添加草酸或硫酸,成钙盐沉淀而除去。经验证明,发酵液经过预处理后,提取收率明显提高。6.3赖氨酸的提取从发酵液中提取赖氨酸通常有四种方法:a.沉淀法,利用赖氨酸生成难溶性盐而沉淀分离,或使赖氨酸结晶析出;b.有机溶剂萃取法;c.离子交换法;d.电渗析法。赖氨酸的提取(2)工业生产主要采用离子交换法提取赖氨酸,该法回收率高,产品纯度高。赖氨酸是碱性氨基酸,等电点(pI)为9.59。在pH=2.0左右能最大程度地被强酸性阳离子交换树脂吸附。pH=7.0~9.0被弱酸性阳离子交换树脂吸附。赖氨酸的直接发酵法可使用黄色短杆菌、谷氨酸棒杆菌、乳糖发酵短杆菌、诺卡杆菌等,碳源可为葡萄糖、醋酸、乙醇和石蜡。经验证明,发酵液经过预处理后,提取收率明显提高。如果洗脱剂浓度太低,洗脱时间长,收集不集中,赖氨酸浓度低。洗脱剂的浓度对洗脱效果有影响。但在无其他铵离子情况下,用量为4.培养条件:培养温度30-32℃。5t(淀粉)/t(赖氨酸);而采用糖蜜发酵,其产酸率、提取率要低一些。赖氨酸发酵工艺及控制要点(9)赖氨酸盐酸盐的重结晶与干燥赖氨酸发酵工艺及控制要点(3)赖氨酸盐酸盐的化学式为C6H14O2N2·HCl,含氮量为15.9,再继续浓缩至22~23oBé。赖氨酸发酵,前期控制温度32℃,中后期30℃。赖氨酸发酵工艺及控制要点(9)洗脱剂(氨水洗脱、氨水+氯化铵洗脱、氢氧化钠洗脱)为了收集蒸发出来的氨蒸气,可采用单效蒸发。563和钝齿棒杆菌PI-3-2(AECr、Hse-);不同菌株,发酵培养基的组成不完全相同,赖氨酸发酵培养基的组成见有关文献。赖氨酸发酵工艺及控制要点(8)如残糖6~20g/L(随原料不同而异),无机离子(如NH4+、Ca2+、Mg2+、K+和一些阴离子,其中NH4+浓度较高)。0被弱酸性阳离子交换树脂吸附。中科院北京微生物研究所选育的北京棒杆菌AS1.代谢主产物赖氨酸,含量为7~8g/L;赖氨酸盐酸盐的重结晶与干燥赖氨酸的直接发酵法可使用黄色短杆菌、谷氨酸棒杆菌、乳糖发酵短杆菌、诺卡杆菌等,碳源可为葡萄糖、醋酸、乙醇和石蜡。赖氨酸的性质(3)所以从发酵液中提取赖氨酸均选用铵型强酸性阳离子交换树脂。赖氨酸发酵工艺及控制要点(5)少量其他氨基酸,如缬氨酸,丙氨酸和甘氨酸,当发酵不正常时含有谷氨酸;赖氨酸的提取(3)强酸性阳离子交换树脂和弱酸性阳离子交换树脂对纯赖氨酸溶液和发酵液中赖氨酸的吸附量是不同的。赖氨酸的提取(4)弱酸性阳离子交换树脂对纯赖氨酸的吸附能力大,但对发酵液中的赖氨酸吸附能力大为降低,这是
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