DB4107_T431-2019_地方流行性牛白血病琼脂凝胶免疫扩散实验方法_新乡市 .docxVIP

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B41 DB4107新乡市地方 标 准

DB4107/T431—2019

地方流行性牛白血病琼脂凝胶免疫扩散试验方法

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前 言

地方流行性牛白血病（enzooticbovineleukosis，简称EBL）是由牛白血病病病毒引起牛的淋巴样细胞恶性增生，进行性恶病质变化和全身淋巴结肿大为特征的一种慢性、进行性、接触传染性肿瘤病。被世界动物卫生组织列为B类疾病，我国农业部把该病列为二类动物疫病。

本标准规定的琼脂凝胶免疫扩散（AGID），是根据地方流行性牛白血病琼脂凝胶免疫扩散试验实验方法（NY/T574-2002）和我市实际情况制定的，是国际贸易指定的诊断方法。

本标准由新乡市农业农村局、新乡市质量技术监督局提出。本标准起草单位:新乡市动物疫病预防控制中心。本标准主要起草人：卢晓辉、鲁毅、马健、王玉锋、刘海林。本标准于2019年10月12日首次发布。

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地方流行性牛白血病琼脂凝胶免疫扩散试验方法

1 范围

本标准规定了地方流行性牛白血病样品的采集、琼脂凝胶免疫扩散试验。本标准适用于地方流行性牛白血病的诊断、检疫和流行病学调查。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

NY/T574 地方流行性牛白血病琼脂凝胶免疫扩散试验实验方法

3 样品的采集

3.1 防护用品及耗材

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在秋冬季节，可以常温运输。在炎热的春夏季节，应当在泡沫箱里，防止冰块，迅速运往实验室进行处理。

3.4 样品的处理

在进行样品处理前，应当注意观察血清是否析出，如若有淡黄色血清析出，可直接用离心机进离心，然后用1mL移液器将血清移至离心管中，做好标记，冷冻保存；如若血清没有析出，则将样品放置进37℃温箱中2h，待血清析出后，再按照上面程序将血清处理、保存。

3.5 注意事项

3.5.1 做好个人防护工作，人员要按要求穿戴防护用品。在样品采集的过程中要注意采样安全，防止被牛踢伤、咬伤以及被针扎伤等事故发生。

3.5.2 保证被检样品质量。在样品处理过程中，如若发现有样品出现胶冻样、溶血或者其他异常情况应当及时将样品废弃，补采。

3.5.3 保护动物福利，在样品采集过程中应尽量使动物不受伤害或者少受伤害。

4 琼脂凝胶免疫扩散试验

4.1 材料和试剂准备

打孔器(内径5mm），琼脂糖（试剂级），平皿，标准阴性血清，标准阳性血清。

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图1：琼脂糖凝胶板打孔示意图

4.3.2.2 打孔和封底

把图案放在琼脂板平皿下，用打孔器按图型准确位置打孔。孔内琼脂用针头小心挑出、勿破坏周围琼脂，将平皿底部在酒精灯上略烤封底。

4.3.2.3 滴加抗原和血清

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4.5.3 可疑

标准阳性血清孔与抗原孔之间的沉淀线末端似乎向毗邻被检血清孔内侧弯曲，但不易判定时需重检，仍为疑似判为阳性。

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