Chemerin在运动调控高脂喂养小鼠骨量、骨微结构和骨生物力学性能中的作用.pdfVIP

中文摘要

研究目的

脂肪因子chemerin与肥胖及肥胖相关疾病（如2型糖尿病、代谢综合征等）

的发生发展密切相关。近年来的研究发现，chemerin不仅影响肥胖及肥胖相关

疾病的糖脂代谢，还影响其骨代谢、调控骨重塑。在肥胖及骨质疏松症患者群

体中，观察到其循环chemerin水平增加，并进一步发现腰椎和股骨骨密度

（bonemineraldensity,BMD）与循环chemerin水平存在负相关性。在体和体外

的研究结果均显示，chemerin能提高破骨活性，抑制骨生成，但也有研究报道

了相反结果，即chemerin能够促进成骨，这可能是由chemerin表达水平和表达

位点的差异引起。Chemerin在骨代谢调控中的影响及其具体机制仍需更多研究。

高脂饮食（highfatdiet,HFD）是导致肥胖的常见原因。目前认为HFD对骨

的影响不是增加而是降低骨量。运动增加骨量、防治骨质疏松症已成为共识。

运动通过增加骨骼机械负荷，释放激素或细胞因子等多种方式参与骨重塑，达

到强骨和改善骨质疏松的目的。但chemerin是否参与运动对骨骼的增强作用，

目前还少见报道。课题组先前的研究发现，有氧运动引起的chemerin水平降低

可能在运动改善HFD小鼠骨代谢中发挥重要作用。本研究通过构建全身性

chemerin敲除小鼠模型，研究chemerin对HFD小鼠骨量、骨微结构和骨生物力

学性能的作用及其对骨代谢关键分子调控，并进一步探究chemerin在运动调节

骨代谢中的作用，为预防和治疗骨质疏松症提供新靶点。

研究方法

1.chemerin全敲小鼠的构建及分组

委托生物公司采用Cre-loxP系统构建全身性chemerin基因敲除[chemerin(-

/-)]小鼠，并用PCR和Westernblot方法确证chemerin(-/-)小鼠的成功建立。

为研究chemerin对HFD小鼠骨代谢的影响，选取8周龄雄性野生型小鼠

（wildtype，WT）与chemerin(-/-)小鼠随机分为普通饮食组（normaldiet,ND）

和HFD组，分别喂以12周的普通饲料（10%脂肪）和高脂饲料（60%脂肪）。

将小鼠分为4组：ND-WT、ND-chemerin(-/-)、HFD-WT、HFD-chemerin(-/-)组，

每组6只小鼠。

为研究chemerin在运动调控HFD小鼠骨代谢中的作用，将ND组和HFD组

小鼠分别分为WT，WT+运动（WT+E），chemerin(-/-)，chemerin(-/-)+E组，每

组6只小鼠。运动组小鼠进行6周中等强度有氧运动（期间保持原有饮食），

每周运动6次，1h/次。

2.小鼠骨量、骨微结构和骨代谢关键分子检测

各组小鼠麻醉处死后剥离双侧的股骨和胫骨，其中，左侧股骨用Micro-CT

检测骨量、BMD和骨微结构；右侧股骨用三点弯曲法检测骨生物力学性能；

HE染色观察股骨基本形态，以及抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrateresistantacid

phosphatase,TRAP）染色观察破骨细胞活性；对左侧胫骨进行Real-timePCR分

析，评估成骨、破骨相关基因的mRNA表达量；对右侧胫骨采用Westernblot技

术，以检测成骨、破骨相关基因的蛋白水平，成骨破骨相关的相关指标有Runt

相关转录因子2（Runt-relatedtranscriptionfactor2,Runx2）、成骨细胞特异性转

录因子（Osterix,OSX）、核因子κB受体活化因子配体（receptoractivatorfor

nuclearfactor-κBligand,RANKL）、组织蛋白酶K（cathepsinK,CTSK）和巨噬

细胞集落刺激因子（macrophagecolonystimulatingfactor,M-CSF）。

3.统计分析方法

实验数据采用SPSS22.0统计学软件包进行数据处理，结果采用均值±标准

差（Mean±SD）表示。各指标的组间比较采用双因素方差分析，事后检验采用

LSD进行两两比较。P＜0.05为显著性差异，P＜