基于非天然氨基酸自组装构建人工金属酶.pdfVIP

摘要

酶是一类具有高特异性和高效催化能力生物催化剂，但存在来源有限、成本

高、易失活变性和难以重复利用等缺点，限制了其在工业领域的使用。这促使人

们开发具有酶活性但克服酶缺点的人工模拟酶，非天然氨基酸不仅保留了氨基酸

的基本结构，而且与过渡金属离子结合作用更强，与过渡金属离子配位自组装后

有望形成类似于天然酶催化的活性中心位点。因此，本文利用了非天然氨基酸作

为自组装后结构单元，与特定的过渡金属离子发生配位后，获得了两类具有天然

酶催化活性的超分子聚集体，并围绕其催化性能、生物相容性和应用潜力开展了

系统研究。

首先，受漆酶催化活性位点的启发，以非天然氨基酸二苯甲酮丙氨酸-(BpA)

2+

为自组装结构单元，与具有氧化还原活性的二价铜离子(Cu)配位自组装为超分

子纳米纤维(BpA-Cu)。结构表征证明，BpA-Cu具有与天然漆酶催化活性中心类

似的电子转移系统，BpA-Cu具有类漆酶活性且催化动力学遵循米氏方程。与天

BpA-Cu(K)

然漆酶相比，具有更小的米氏常数值，并在强酸、强碱、高温等条

m

件下均具有高催化能力，且高盐时催化效率是无盐条件的3.6倍，还对多种有毒

酚类化合物都具有高效催化氧化作用，具有底物通用性和良好的重复利用性。此

外，利用小鼠小胶质细胞BV-2为模型细胞测定其细胞毒性，证明了BpA-Cu具

有良好的生物相容性。

Nα--D-

然后，受碳酸酐酶催化活性位点的启发，以非天然氨基酸苄氧羰基

2+

Nα-CDH(Zn)

组氨酸（）为自组装结构单元，与具有水解活性的二价锌离子配

位自组装为具有乙酰胆碱酯酶和碳酸酐酶活性的人工金属酶Nα-CDH-Zn。当以

4-Nα-CDH-ZnK

硝基苯丁酸酯为催化底物时，具有比乙酰胆碱酯酶更小的值和

m

更高的催化效率，并在极端条件下长期孵育催化活性基本无损失且具有良好的重

复利用性，而以碘化硫代乙酰胆碱为底物时的催化效率较低。Nα-CDH-Zn对BV-2

细胞毒性低证明了具有良好的生物相容性。

BpA-CuNα-CDH-Zn

本研究制备的两种非天然氨基酸人工金属酶（和），具

有生态友好、成本低、高效、稳定、广泛的底物通用性和优秀的可重复使用性等

优点，在环境修复、医疗保健和工业应用等方面具有巨大潜力。这种基于单个氨

基酸自组装的人工金属酶制备方法也为人工酶设计提供了的潜在选择方案。

关键词：人工金属酶，漆酶，碳酸酐酶，乙酰胆碱酯酶，非天然氨基酸，生物

相容性

I

II

ABSTRACT

Enzymeisakindofbiocatalystswithhighspecificityandhi