血糖含量的测定.pptVIP

第1页，共11页，星期日，2025年，2月5日一实验目的1、掌握无蛋白血滤液2、血糖测定的原理和方法第2页，共11页，星期日，2025年，2月5日二实验原理1.无蛋白血滤液的制备血液中所含的蛋白质常影响其他成分的测定，可以采用钨酸法除去蛋白质，制备无蛋白血滤液，供非蛋白氮、血糖、氨基酸、尿素等测定使用。钨酸钠与硫酸混合生成钨酸。在pH值小于等电点的溶液中，钨酸与血液中的蛋白质分子的阳离子形成不溶性的蛋白沉淀，沉淀过滤或离心，上清液即为无色、透明、pH值约为6的无蛋白滤液。第3页，共11页，星期日，2025年，2月5日2.血糖测定葡萄糖是一种多羟基的醛类化合物，具有还原性，与碱性铜试剂混合加热，葡萄糖分子中的醛基被氧化成羧[suō]基，而铜试剂中的二价铜被还原成砖红色的氧化亚铜沉淀。氧化亚铜可以使磷钼[mù]酸还原成钼蓝，使溶液成蓝色。其生成蓝色的深度与血滤液中葡萄糖浓度成正比。通过分光光度计比色，即可求出血糖的含量。第4页，共11页，星期日，2025年，2月5日三实验器材仪器：锥形瓶；试管及试管架；离心机；电炉；血糖管；奥氏吸管；分光光度计。试剂：动物全血；1／3mol·Ｌ硫酸溶液；碱性铜试剂；磷钼酸试剂；0.25％苯甲酸溶液；葡萄糖应用标准溶液0.1mg·mL－１－１第5页，共11页，星期日，2025年，2月5日四实验步骤1.无蛋白血滤液的制备吸取充分均匀的抗凝血1mL，擦净管外血液，缓慢放入锥形瓶或试管中。加入蒸馏水7mL，混匀，使完全溶血。加入0.33mol·L硫酸溶液1mL，充分混匀。此时血液由鲜红色变为棕色，静置5~10min，使其酸化完全。加入10%钨酸钠溶液1mL，边加边摇。当摇到不再产生泡沫时为止。说明蛋白质已经完全变性沉淀。放置5~10min，过滤或离心出去沉淀，既得无蛋白滤液（每毫升相当于1/10全血）－１第6页，共11页，星期日，2025年，2月5日2.血糖测定取3支血糖管按下表操作：?血糖管空白管标准管测定管无蛋白血滤液蒸馏水葡萄糖应用标准溶液碱性铜试剂—2.0—2.0—1.01.02.01.01.0—2.0混匀，同时放入100℃沸水裕中煮8min，取出置冷水中冷却3min（切勿摇动血糖管）磷钼酸试剂2.02.02.0混匀后放置2min（使二氧化碳气体逸出）蒸馏水加至252525试剂/mg第7页，共11页，星期日，2025年，2月5日用蒸馏水加至25刻度处后，混匀，空白管调零，在波长420nm处比色，记录各管光密度。计算求出每100mL血液中葡萄糖的质量（mg）计算公式：样品中的血糖（mg/100mL）=（测定管光密度/标准管光密度）*0.1*100/0.1=（测定管光密度/标准管光密度）*100第8页，共11页，星期日，2025年，2月5日