最新实习二红细胞网织红细胞检测课件课件.pptVIP

目的和要求熟悉正常红细胞和网织红细胞的形态学特点掌握血红蛋白测定方法、参考值和临床意义掌握血细胞多参数报告单的正常值及其增减的临床意义每升血液中红细胞数目=五个中方格内红细胞个数×5(变为0.1u1)×10(变为1u1)×106(变为1L)×200(稀释倍数)=五个中方格内红细胞个数×1010清洁仪器：计数后，将盖玻片及计数板用水冲洗干净，再用绸或细布擦干吸管先用蒸馏水，继用95%酒精，后用乙醚洗涤干净，保存备用注意事项不能在有水肿、炎症、淤血等部位或刺血过浅处采血所用吸管、试管、滴管及血细胞计数板须干净无水操作迅速，充池一次完成，不能有气泡红细胞分布不均，每个中方格之间相差大于20个时要重新充池计数血红蛋白测定方法：氰化高铁血红蛋白测定法原理：血红蛋白(Hb)被高铁氰化钾[K3Fe(CN)6]氧化为高铁血红蛋白（Hi），Hi与氰离子结合成氰化高铁血红蛋白（HiCN）HiCN在540nm有一吸收峰测定其光密度而得血红蛋白浓度[试剂与器材]器材：分光光度计试管，试管架取血吸管:一次性定量采血管(20ul)刺血针蒸馏水75%酒精及干棉球试剂：氰化高铁血红蛋白稀释剂高铁氰化钾[K3Fe(CN)6]200mg氰化钾（KCN）50mg无水磷酸二氢钾140mgTritonX-1001.0ml用蒸馏水溶解并稀释至1L该试剂应呈透明、淡黄色，pH在7.0～7.4之间，以蒸馏水作空白，在540nm比色，读数是0溶液应放置棕色试剂瓶中，塞紧后保存于冰箱中（但不宜冻结），至少可稳定数月如发现试剂变绿、浑浊则不能使用其中非离子表面活性剂可加速溶血，缩短转化时间，防止血浆蛋白改变引起的浑浊[实验步骤]在试管中准确加入HiCN稀释试剂5.0ml，作为测定管用血红蛋白吸管准确吸取全血20u1，擦去管端血迹，置于试剂中，冲洗3次，混匀将混合液放置3分钟以后，倒入光径1cm比色皿，用分光光度计在540nm进行比色以蒸馏水或HiCN稀释试剂作空白管，校正光密度到0点，读取测定管光密度读数计算：???????????血红蛋白（g/L）=测定管光密度×（64458/44000）×251

??????=测定管光密度A×367.7式中：

（1）64458是目前国际公认的血红蛋白分子量

（2）44000是国际血液学标准化委员会公布的血红蛋白摩尔吸光度

（3）251是稀释倍数

[方法评估]HiCN法操作简便，试剂单一，显色快且稳定，可以根据吸光度直接计算结果－－被列为国际血红蛋白测定的参考方法，也是我国推荐的首选方法高球蛋白血症和白细胞明显增高－－可导致反应液浑浊而影响结果[注意事项]用吸血管吸血过程应仔细、认真，准确把握住吸入的血液量是初学者的一个难点，也是实验结果准确与否的一个关键HiCN稀释液不能贮存在塑料瓶中，否则会使CNˉ含量下降，测定结果偏低－－应贮存在棕色有塞玻璃瓶中4℃冰箱保存一般可用数月，但不能在0℃以下保存，因为结冰可引起高铁氰化钾还原，使溶液褪色失效[注意事项]分光光度计使用要点

1、开启电源，指示灯亮，选择开关置于“T”，波长调置使用波长。仪器预热20分钟。2、打开试样室盖（光门自动关闭），调节“0”旋钮，使数字显示为“00.0”。盖上试样室盖，将比色皿架处于蒸馏水校正位置，使光电管受光，调节透过率“100%”旋钮，使数字显示为“100.0”。3调整仪器的“00.0”和“100%”，将选择开置于“A”，调节吸光度调零旋钮，使得数字显示为“.000”，然后将被测样品移入光路，显示值即为被测样品的吸光度的值。[注意事项]氰化钾是剧毒品，配制稀释液时要按剧毒品管理程序保管、操作配制好的HiCN稀释液中因氰化钾含量低，又有高铁氰化钾存在，毒性不是很大。若进入体内，高铁氰化钾氧化血红蛋白，生成高铁血红蛋白。后者结合CNˉ，起到一定的解毒作用，但仍应妥善保管测定后的废液不能与酸性溶液混合－－氰化钾遇酸可产生剧毒的氰氢酸气体为防止氰化钾污染环境，比色测定后的废液集中于广口瓶中－－应注意废液处理，可用除毒液除毒除毒方法取硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）二份加NaOH一份，在研钵中研细，配成100g/L的悬液。每1000ml废液加上述除毒液5ml，放置3小时，不时搅拌，使剧毒的氰化钾成为无毒的亚铁氰化钾废液加入等量的水，混合后每升加次氯酸铋液(安替福化)35毫升，充分混匀后敞开容器，置室温15小时后，排入下水道参考值－－多次检查