侯一平版《法医物证学》（第4版）第四章 知识点笔记.pdfVIP

侯一平版《法医物证学》（第4版）第四章知识点笔记

教材信息：人民卫生出版社2016年版，法医学专业核心教材

章节主题：法医DNA分析技术基础（连接DNA分子基础与实际鉴定的核心技术体系）

一、限制性片段长度多态性（RFLP）技术（高频考点）

★

1.核心原理（核心考点）

★★

•定义：利用限制性内切酶（识别特定碱基序列的核酸酶）切割不同个体的基因组DNA，因

碱基序列差异导致酶切位点分布不同，产生长度不同的DNA片段，通过检测片段长度差异

实现个体区分。

•关键前提：基因组中存在“限制性内切酶识别位点的多态性”（即不同个体在同一基因座

上，酶切位点的有无或位置不同）。

2.经典检测流程（Southernblot杂交法）

1.DNA提取：从检材（如血痕、组织）中提取高分子量基因组DNA（需20kb，避免降解

影响片段检测）；

2.酶切反应：加入特异性限制性内切酶（如HinfⅠ、EcoRⅠ），37℃孵育4-6小时，将

DNA切割为不同长度片段；

3.琼脂糖凝胶电泳：通过电泳分离酶切片段（片段越长，迁移速度越慢）；

4.转膜（印迹）：将凝胶中的DNA片段转移至硝酸纤维素膜或尼龙膜上（保持片段位置不

变）；

5.杂交反应：加入标记探针（如放射性³²P标记的VNTR特异性探针），探针与膜上互补片

段结合；

6.显影检测：通过放射自显影或化学发光，显示与探针结合的片段位置，形成RFLP图谱。

3.法医学应用与局限性

维度具体内容

应用场景早期个人识别（如凶杀案

血痕匹配）、亲权鉴定

（需大样本量检材）

核心优势①直接检测基因组

DNA，无需PCR扩增；

②多态性较高（基于

VNTR标记）

关键局限性（★高频考①需大量高质量DNA

10-50μg

点）（，无法检测微

量降解检材，如陈旧毛/

发、烟蒂）；②检测周期

长（2-3天）；③需放射

性标记，操作风险高；④

分辨率有限（无法区分片

段长度差异50bp的等

位基因）

二、可变数目串联重复序列（VNTR）技术

1.VNTR的结构特征（★次高频考点）

•定义：属于小卫星DNA（重复单位10-60bp），由核心重复序列（如16bp的

“GGGCAGGAXG”）和侧翼保守序列组成，不同个体的核心重复次数（n）差异显著（如

n5-20），导致VNTR片段长度多态性。

•关键特点：①侧翼序列保守，可设计特异性探针（用于RFLP检测）；②重复次数差异

大，个体间VNTR图谱高度特异（如“DNA指纹技术的核心标记）。”

2.与RFLP的关联（★高频考点）

•VNTR是RFLP技术的“核心检测标记”：限制性内切酶的酶切位点位于VNTR的侧翼序

列，不同个体VNTR重复次数不同→酶切后片段长度不同→通过RFLP图谱呈现多态性。

•示例：某VNTR基因座，个体A重复次数n8（片段长度1.2kb），个体B重复次数

n12（片段长度1.5kb），经相同酶切后，电泳可清晰区分1.2kb与1.5kb片段。

3.技术局限性（推动STR技术发展的核心原因）

•片段长度长（1-20kb）：降解检材中长片段易断裂，无法检测；

•检测效率低：一次杂交仅能检测1个VNTR基因座，需多次杂交才能提高识