实验三红曲色素的提取.pptVIP

*********三、实验步骤1．浸米:取1/3袋左右的大米，25℃以上浸米约20h,大米吸收水分约在28%～30%。2．蒸米:将浸好的米用清水淋去米浆水,沥干,即可蒸米。上汽火力要强,加水40%，121℃，蒸30分钟，待全部圆气以后，饭粒呈玉色,粒粒疏松,不结团块。3．摊凉接种:将蒸熟的曲料倒在超净工作台上迅速打碎团块,摊平冷却到30～32℃。每组准备好500ml三角瓶装5-10厘米左右米饭。然后在无菌操作台上接种，接种量2%～10%，接种前用具消毒灭菌，在酒精灯火焰上方操作接种。充分翻拌混合均匀,操作要迅速,以减少杂菌污染。第26页，共44页，星期日，2025年，2月5日4．发酵培养:接好种的三角瓶在恒温恒湿生长培养箱中，30～35℃培养5～8d。每天翻曲一次，观察到曲粒表面略有干皮、少数曲粒略有微红斑点等现象时即可“吃水”，使曲粒吸收一定水分,以利菌丝逐渐向内生长。吃水方法:一边拌曲，一边向曲盘中喷洒无菌水,使曲粒表面润湿并微有发胀。培养3天后米粒逐渐成红色。观察记录色素产生的过程。培养5-7天后，固态发酵结束的红曲置于鼓风干燥箱内50-60℃鼓风干燥。第27页，共44页，星期日，2025年，2月5日5．成品质量检查外观检查:曲粒表层光滑紫红,曲粒中心呈玉色,不得有空心和红心。曲粒断面菌丝均匀，具有红曲特有的曲香,不得有酸气等不正常气味。 生物与理化项目检查:水分12%以下,容量(l00mL)44.5～46.5g,淀粉含量５９％～６２%,无细菌和其他霉菌污染。第28页，共44页，星期日，2025年，2月5日四、注意事项1、浸米时用醋酸调PH至5.0-5.5左右，有利于发酵产品色价的提高。2、清洗时要至无混浊。3、蒸饭时，要熟过心，但不能结团。4、接种时注意无菌操作。5、注意控制过程中的温度。第29页，共44页，星期日，2025年，2月5日一、实验原理大米经红曲菌固体发酵后产生了一系列红曲菌的代谢产物,但这些产物的量非常少,大米仍占固体发酵产物的绝大部分体积,为了降低运输成本,常常要对红曲菌的代谢产物进行提取和浓缩。红曲的代谢产物中既有水溶性组分,也有脂溶性组分,因此可用80%的丙酮(丙酮:水=80：20)抽提。用HCl或NaOH处理可以将其中的酸溶性组分、碱溶性组分和中性组分分开。红曲色素的提取及红曲色价测定第30页，共44页，星期日，2025年，2月5日一、实验原理选择溶剂一般要注意以下四点：①溶剂对所需成分的溶解度要大，对杂质溶解度要小，或反之。②溶剂不能与天然药物成分产生化学反应，即使反应亦属于可逆性的。③溶剂要经济易得，并具有一定的安全性。④沸点宜适中，便于回收反复使用。红色素能溶于80%的乙醇中，可通过萃取从米粒中提取出来,红曲色素在505nm处有最大的吸收峰,可用分光光度计来测定。第31页，共44页，星期日，2025年，2月5日二、实验器材与试剂1、旋转蒸发仪,分液漏斗，分光光度计,水浴锅,量筒等。2、酸乙酯,丙酮，80%乙醇等第32页，共44页，星期日，2025年，2月5日三.实验步骤12红曲色素的提取红曲色价测定第33页，共44页，星期日，2025年，2月5日一般提取方法：萃取法组织培养法粉碎法压榨法酶反应法微生物发酵法人工合成法红曲色素的提取第34页，共44页，星期日，2025年，2月5日红曲色素的提取第35页，共44页，星期日，2025年，2月5日具体步骤：1、取200g固体发酵之红曲,在植物粉碎机中将其粉碎；第36页，共44页，星期日，2025年，2月5日2、将红曲粉放于500mL三角瓶中,加入提取液(丙酮:水=80:20)200-300mL；

第37页，共44页，星期日，2025年，2月5日3、室温下摇动10-15min左右，过滤；4、在旋转蒸发仪中减压蒸去丙酮(尚有水分，60℃)；第38页，共44页，星期日，2025年，2月5日5、用lmol/LHCl调残留液(约l00mL)的pH至3.0,加至分液漏斗中；加入150ml的醋酸乙酯（EtOAc)分次抽提。第39页，共44页，星期日，2025年，2月5日图一：红曲代谢产物分离工艺流程图第一次第二次第三次第四次第40页，共44页，星期日，2025年，2月5日分工：一组：配制提取液（丙酮：水=80