DB65 成年绵羊体外胚胎生产技术操作规程.docxVIP

ICS65.020.30B43

新疆维吾尔自治区地方标准

DB65/T4073—2017

成年绵羊体外胚胎生产技术操作规程

Technicaloperationproceduresforinvitroembryoproductionofadultsheep

2017-12-10实施2017-11-10发布

2017-12-10实施

新疆维吾尔自治区质量技术监督局发布

DB65/T4073—2017

前言

本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的要求制定。

本标准由新疆维吾尔自治区畜牧厅提出。

本标准由新疆维吾尔自治区畜牧厅归口。

本标准起草单位：新疆畜牧科学院生物技术研究所(新疆畜牧科学院中国-澳大利亚绵羊育种研究中心)、新疆维吾尔自治区畜牧总站、新疆华牛天俊种畜繁育工程有限公司。

本标准起草人：汪立芹、耿娟、林嘉鹏、吴阳升、卢全晟、卫新璞、韩冰、阿米娜·阿布都瓦力、唐森、张建光、牛志刚、黄俊成。

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DB65/T4073—2017

成年绵羊体外胚胎生产技术操作规程

1范围

本标准规定了供体绵羊的选择与饲养管理、激素处理、手术法活体采卵、屠宰后摘取卵巢采卵、体外受精、体外培养的技术操作规程。

本标准适用于供体绵羊体外胚胎生产技术操作。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T5458液氮生物容器

NY/T1571羊胚胎移植技术规程

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

3.1

供体donor

可用于胚胎生产的绵羊。

3.2

绵羊体外胚胎生产invitroembryoproduction

指对母体进行激素处理，通过活体采卵或屠宰场摘取卵巢后采集卵母细胞，在体外条件下对卵母细胞进行成熟培养、体外受精、体外培养，获得可用的胚胎，并将胚胎移植至同期发情受体，或冷冻的过程。

4供体绵羊的选择与饲养管理

4.1选择条件

按照NY/T1571对供体羊进行选择，并符合下列要求：

a)品种优良，符合品种外貌特征、谱系清楚的一级以上的羊；

b)1.5至6周岁；

c)产后空怀90d以上，至少有2次以上正常发情周期；

d)体质健壮，繁殖机能正常，无遗传疾病、生殖系统疾病和传染性疫病。

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4.2饲养管理

a)保持饲养环境卫生、温湿度适宜，尽可能减少或避免应激反应；

b)制定合理的日粮配方；

c)饮水清洁卫生；

d)激素处理前2个月加强饲养管理，并适量补充维生素A、维生素D、维生素E。

5供体绵羊的激素处理

5.1药品

所需药品见附录A。

5.2激素处理方法

放入海绵栓或CIDR(含孕激素阴道栓)之日，作为发情周期的第0天，在第9天开始注射FSH,每天早、晚各注射1次，中间间隔约12h,连续3d,递减注射。注射第6次后间隔12h,对供体绵羊回收卵母细胞后取出海绵栓。参见附录B。

6手术法活体采卵、屠宰后摘取卵巢采卵

6.1手术法活体采卵

手术部位在离乳房前端约2cm处，腹中线大约6cm的左侧或右侧位置，按下列要求执行：

a)注射第5次FSH时开始空腹(手术前空腹24h),禁饮禁食；

b)麻醉及保定：根据绵羊体重，肌肉注射静松灵0.3mL～0.5mL,将其仰卧在手术架上并用绳索保定；

c)使用肥皂水湿润手术部位的羊毛，刮毛刀刮去羊毛，并用水清洗干净；

d)用2%～4%碘酊消毒手术部位，并停留5min;

e)用75%酒精对手术部位脱碘、晾干；

f)手术创布覆盖羊体；

g)避开血管，用手术刀纵向切开3mm～5mm长的刀口，将皮下结缔组织分离，暴露肌膜。再用刀柄后端将肌肉层和腹膜钝性分离；

h)食指和中指从刀口进入，在骨盆腔、耻骨前沿触摸子宫角，并将子宫、卵巢引出刀口外；

i)用吸有抽卵液的10mL注射器抽取突出卵巢表面的卵泡，边缘用纱布止血。回收卵泡液约6mL左右时，推入经抽卵液湿润的圆底试管，并放入37℃水浴锅沉淀；

j)在体视镜下捡出所有卵母细胞。

6.2屠宰后摘取卵巢采卵

a)注射FSH第6次后的12h,将待屠宰羊拉至屠宰场屠宰；

b)在37℃水浴锅中预热生理盐水，并在生理盐水中加入青霉素和链霉素各半瓶，倒入保温杯；