蛋白质基础及检测技术.pptVIP

蛋白质基础及检测技术演示文稿;优选蛋白质基础及检测技术;蛋白质不仅在功能上与糖、脂肪不同，在元素组成上亦有差别。

根据蛋白质的元素分析表明，其元素组成依次为：碳(50-55%)、氧（19-24%）、氮（13-19%）、氢（6-7%）硫（0-4%）。有的还含有少量磷、铁、铜、锌、锰、钴、钼、碘等元素。一切蛋白质皆含有氮并且大多数蛋白质含氮量比较接近而恒定，一般为15—17％，平均为16％。这是蛋白质元素组成的一个重要特点，也是各种定氮法测定蛋白质含量的计算基础。即用定氮法测得的含氮量乘以6．25，即可算出样品中蛋白质的含量。但有的蛋白质中氮的含量有一定差别，应根据其氮的真实含量进行计算。;3.1氨基酸的结构

自然界的氨基酸超过300种，但是组成人体蛋白质的氨基酸有20种，可以看作是羧酸分子中α-碳原子上的氢原子被氨基取代而成的化合物，均属于α-氨基酸，即其氨基和羧基都连接在α-碳原子上。

氨基酸碳链表示：其结构可用下列通式表示：;各种氨基酸在结构上有下列共同特点：

组成蛋白质的氨基酸皆为α-氨基酸。

不同的α-氨基酸，其R侧链不同（氨基酸分类的依据）。它对蛋白质的空间结构和理化性质有重要的影响。

除R侧链为氢原子的甘氨酸外，其它氨基酸的α-碳原子所连接的四个原子或基团互不相同，该碳原子都是不对称碳原子。

20种氨基酸中的脯氨酸含有亚氨基，所以它是亚氨基酸。半胱氨酸在蛋白质分子中多数是以胱氨酸的形式存在。;3.2氨基酸的分类

根据侧链R基团的结构和性质进行分类：

1）酸性氨基酸——谷氨酸Glu和天冬氨酸Asp

其R基团含羧基，在pH7时，羧基可解离而使分子带负电荷。游离或在蛋白质中都带负电荷，以酸根形式存在。在蛋白质中与正电基团形成盐键。

2）碱性氨基酸——赖氨酸Lys、精氨酸Arg和组氨酸His

其R基团含碱性基团，在pH7时，这些基团可质子化而使分子带正电荷。

3）非极性疏水性氨基酸

其R基团无极性、不解离，且为疏水性的。

4）不解离的极性氨基酸（极性非电离氨基酸）——羟基氨基酸+巯基氨基酸+甘氨酸

其R基团虽有极性但不能解离。

5）蛋白质中少见的氨基酸——无遗传密码，来自翻译后加工修饰。

;3.3氨基酸的理化性质

3.3.1两性解离及其等电点

氨基酸是两性电解质：

氨基酸既含羧基,又含氨基,同时能起酸和碱的作用，是两性电解质，在水溶液中主要以兼性离子（偶极离子）的形式存在。

氨基酸的等电点：

在某一pH的溶液中，氨基酸解离成阴、阳离子的趋势和程度相等而成为兼性离子，呈电中性时溶液的pH称为该氨基酸的等电点（isoelectricpoint，pI）。

;3.3.2紫外吸收性质

20种氨基酸在可见光区无吸收。在远紫外区：＜220nm都有光吸收。在近紫外光区（220-300nm）只有苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸有吸收；色氨酸、酪氨酸的最大吸收峰都在280nm附近。

由于大多数蛋白质中含有色氨酸和酪氨酸残基，所以可以测定蛋白质溶液的280nm的光吸收值对蛋白质进行定量分析。

3.3.3茚三酮反应

氨基酸与茚三酮水合物共热生成蓝紫色化合物，在570nm处有最大吸收峰，可以作为定量测定氨基酸的方法。;4.1肽键

一个氨基酸的α-羧基与另一个氨基酸的α-氨基脱水缩合形成的共价键（-CO—NH-）称为肽键，又称酰胺键。蛋白质分子中的氨基酸通过肽键连接。

;4.2肽

氨基酸通过肽键连接起来的化合物称为肽。;4.3氨基酸残基（residue）

氨基酸在形成肽链后，因有部分基团参加肽键的形成，已经不是完整的氨基酸，故将蛋白质肽链中的每个氨基酸部分称为氨基酸残基。

每一个氨基酸残基上都有一个R侧链，不同R侧链有不同的性质和功能。

多肽链有两端：

具有游离α-氨基的称为氨基末端（N-末端，aminoterminal），通常写在肽链的左端。

具有游离α-羧基的称为羧基末端（C-末端，carboxylterminal），常写在肽链的右端。

多肽链的方向从N-端到C-端，肽链也是从N-端到C-端按氨基酸残基的顺序来命名的。

;N端测序

几乎所有的蛋白合成都起始于N-端，蛋白质N-端的序列组成对于蛋白质整体的生物学功能有着巨大的影响力。例如N-端序列影响蛋白质的半衰期，同时关联着蛋白亚细胞器定位等，这些与蛋白的功能和稳定性息息相关，对蛋白进行N-端测序分析，有利于帮助分析蛋白质的高级结构，揭示