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解析细胞氧化应激中PRAK对磷酸化蛋白的调控：机制与发现

一、引言

1.1研究背景

1.1.1细胞氧化应激的危害

细胞氧化应激是指细胞内活性氧簇（ROS）水平高于细胞抗氧化能力时产生的适应性反应。ROS包括超氧阴离子（?O_2^-）、羟自由基（?OH）、过氧化氢（H_2O_2）、一氧化氮（NO?）等，它们是细胞内多种正常代谢过程的产物，在生物体内扮演着双重角色。在低浓度或适当浓度时，ROS对细胞免疫应答、对抗感染原以及相关细胞信号转导过程至关重要，还参与有丝分裂的应答过程。然而，当体内ROS过量时，氧自由基会对生物体造成伤害，引发氧化应激。

氧化应激与多种严重的病理过程紧密相关，对人类健康构成了重大威胁。在心血管疾病方面，氧化应激是动脉粥样硬化发生发展的关键因素之一。血管壁处的氧化应激可引起低密度脂蛋白的氧化修饰（ox-LDL），ox-LDL会激活平滑肌细胞、巨噬细胞等，并诱导血管细胞黏附分子-1、单核细胞化学趋化蛋白-1的基因表达改变，进而促进动脉粥样硬化的形成。同时，氧化应激还会导致血管内皮功能障碍，使血管舒张功能受损，增加心血管疾病的发病风险。高盐、高脂、高糖和高胆固醇饮食等不良生活习惯会加剧氧化应激，进一步恶化心血管健康状况。

癌症的发生发展也与氧化应激密切相关。氧化应激产生的过量ROS会对细胞结构以及核酸、脂质和蛋白质等造成损伤。例如，羟自由基（?OH）可以与DNA分子的所有组份发生反应，导致嘌呤、嘧啶以及脱氧核糖骨架的损伤，进而引发基因突变，使细胞发生癌变。此外，氧化应激还会促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移，影响肿瘤的治疗效果。一些研究表明，抗氧化剂的摄入可能有助于降低癌症的发生风险，但具体机制仍有待进一步深入研究。

神经紊乱疾病如阿尔茨海默病和帕金森病等，也与氧化应激存在紧密联系。在阿尔茨海默病中，氧化应激导致β-淀粉样蛋白的沉积和神经元纤维缠结的形成，进而引发神经元死亡和认知功能障碍。帕金森病中，氧化应激则会导致黑质多巴胺能神经元的死亡，引起运动功能障碍等症状。研究还发现，氧化应激与糖尿病的发病机制相关，它会导致胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能障碍，影响血糖的正常调节。

除了上述疾病，氧化应激还是衰老的重要诱因。随着年龄的增长，机体的抗氧化能力逐渐下降，ROS的积累逐渐增多，导致细胞和组织的损伤不断加剧，从而出现衰老的各种表现，如皮肤松弛、皱纹增多、免疫力下降等。

1.1.2PRAK在细胞氧化应激中的重要地位

有丝分裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号转导通路在真核细胞的氧化应激反应中起着关键作用。已知的MAPK家族包括细胞外调节蛋白激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、p38MAPK和大丝裂原活化蛋白激酶1（BMK.1）。该信号通路能够将细胞表面受体接收到的外部信号传递到细胞核内部，调控基因的表达，从而影响细胞的生长、发育、分化、增殖、凋亡以及对各种内外刺激的响应。尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1（NADPHoxidase1，NOX1）功能产物、过氧化物和过氧化氢等氧化产物均可激活MAPK在MEK和ERK1/2水平上的信号级联。而且，MAPK氧化应激过程中信号转导通路的激活具有类型特异性和刺激特异性，内源性过氧化氢激活ERK而不激活p38激酶；相反，外源性的过氧化氢激活p38激酶而非ERK。

PRAK（p38regulated/activatedkinase），即MK5，于1998年被发现，是MAPK信号转导通路中一种受p38调控的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。PRAK与其他受p38调控的MK族蛋白均存在核定位和核输出信号，但其两个定位信号有部分序列重叠，这提示PRAK蛋白在细胞内定位方面有特殊的调控机制，也暗示其在功能方面相比于其他MK族蛋白存在独特之处。

已有研究表明，PRAK在细胞氧化应激反应中扮演着不可或缺的角色。在受到外源性过氧化氢刺激时，PRAK-/-型小鼠胚胎成纤维细胞（mouseembryofibroblasts，MEF）凋亡率明显高于PRAK+/+型细胞，这表明PRAK蛋白对细胞在氧化应激环境下的存活具有重要的保护作用。北京大学王巍和张毓团队的研究发现，PRAK是Th17中关键的抗氧化应激调节分子。PRAK可直接结合NRF2蛋白，通过磷酸化NRF2558位丝氨酸促进其蛋白稳定性，进而促进胞内ROS的清除，这一过程不依赖经典的泛素-蛋白酶体途径，是一种全新的NRF2蛋白降解方式。PRAK缺陷会导致Th17的胞内ROS显著升高，而清除胞内ROS，可显著挽救PRAK缺陷导致的Th17分化障碍。并