组织培养实验室及操作技术.pptVIP

第一节实验室设置及基本技术;组织培养实验室布局的总体要求

便于隔离

便于操作

便于灭菌

便于观察;基本实验室;;组织培养准备实验室;缓冲室;培养室;无菌室（一）;无菌室（二）;二、仪器与设备;冰箱;天平;培养基分装器;2、灭菌设备

蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫外灯。;蒸汽压力灭菌锅;干热消毒柜;无菌瓶顶过滤装置;3、无菌操作设备;无菌接种箱;4、细胞培养设备;培养架;HZC-250恒温振荡培养箱;5、细胞学鉴定设备

光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜;1、玻璃器皿;2、金属材质用具;四、洗涤技术;2、塑料用品洗涤;3、金属用品洗涤;配方成分;五、灭菌技术;2、灭菌;饱和蒸汽压力与其对应的温度;（3）塑料器皿灭菌：

多采用高压蒸汽消毒灭菌

（4）金属用具灭菌：灼烧灭菌

浸入95%酒精，后置于酒精火焰上灼烧，冷却后使用;（5）接种室灭菌;（6）外植体灭菌;常用消毒剂消毒灭菌比较表;;1、消毒，更换实验服、帽子与鞋子，进入接种室。

2、打开超净工作台和无菌操作室的紫外灯，照射40min左右，后关闭。

3、开启过滤室风机，使无菌风吹拂工作台面和四周的台壁。

4、用70%—75%的酒精擦拭工作台和双手。;5、用沾有70%—75%酒精的纱布擦拭盛培养基的培养器皿，放进工作台。

6、把解剖刀、剪刀、镊子等器械浸泡在95%的酒精中，再在火焰上消毒，放在器械架上。

7、在酒精灯火焰附近切割备用的接种材料。

8、打开瓶口，用火焰烧瓶口，转动瓶口使瓶口各部分都烧到。;9、取下接种器械，在火焰上消毒。

10、把培养材料放入培养瓶，盖上瓶口。

11、接种结束后，清理和关闭超净工作台。;第二节植物组织培养所需的环境

条件及营养成分;温度

光照

湿度

气体

培养基的渗透压

pH值;二、营养成分;Arnon和Stout（1939）提出的确定植物必需营养元素的3个标准;国内外公认的高等植物所必需的营养元素有16（17）种：

C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S、Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl、（Ni）

在植物中含量差别很大，同一元素在植物不同时期、不同条件下含量也不同。;根据植物体内含量多少，可把这些元素分为

※大量营养元素：占干物质重量的0.1%以上；

C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S等9种

※微量营养元素：占干物质重量的0.1%以下

有的只含0.1mg/kg

Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl等7种

;1、大量元素

N是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分，在植物生命活动中占有重要的位置。

P是磷脂的主要成分。培养基中常用KH2PO4NaH2PO4等。

K对碳水化合物合成，转移，以及氮素代谢等有密切关系。;Mg、S、Ca是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂，对核蛋白体结构具有稳定作用；

S是含S氨基酸的蛋白质的组成成分。

Ca是构成细胞壁的成分，对细胞分裂，稳定质膜结构有显著作用，此外，Ca及钙调素在细胞信号转导中起重要作用。;2、微量元素

在微量元素中，铁的使用最大：

◆一些氧化酶的组成成分

◆叶绿素形成的必要条件

◆使用乙二胺四乙酸铁（EDTA-Fe）鳌合物防止铁的沉淀;硼与蛋白质合成、糖类运输有着密切的关系

铜是某些氧化酶的成分，能够促进离体根的生长

锰参与植物的光合、呼吸代谢

钼参与氮素的代谢

氯是光合作用水光解的活化剂

微量元素的主要作用是作为酶的辅助因子或激活剂参与代谢的调节。;?缺铁症状：叶面呈绿色网纹状失绿。随病势发展，叶片失绿程度加重，出现整叶变为白色，叶缘枯焦，引起落叶。严重缺铁时，新梢顶端枯死。;缺铜症状：

新梢顶端叶片的叶尖失绿变黄，叶片出现褐色斑点至扩大变成深褐色，引起落叶。

枝顶端生长不良，其下部的芽开始生长，形成丛生的细枝。;缺锰典型症状：

叶脉间失绿褪色，但叶脉仍保持绿色，脉间出现坏死斑，缺素症状由幼叶开始。;缺钼典型症状：

叶较小，叶脉间失绿,有坏死斑点，且