皮肤科细胞培养及临床应用.pptxVIP

皮肤病学相关研究中

所涉及的细胞培养问题中国医学科学院皮肤病研究所李新宇2004年2月2025/9/251

细胞培养涉及的基本知识2025/9/252

最常见的两种生长型细胞2025/9/253贴壁依赖性细胞(Anchorage-dependentcells)01贴附于不起化学作用的物质(玻璃、或塑料等无活性物质)的表面生长、生存和维持。02悬浮培养细胞(Suspensionculture)03细胞或细胞聚集体悬浮于液体培养基中增殖。04

细胞系(Cellline)：细胞培养中常用的几个术语2025/9/254原代培养物经首次传代成功后即成细胞系。01连续传代连续传代02连续细胞系有限细胞系03(已建成的细胞系)04

细胞株(Cellstrain):由具有某些特性与标志的细胞选择或克隆化而派生的亚系。细胞周期(Cellcycle)细胞前一次分裂结束开始至本次分裂结束所经历的时相过程。4个时期：S期：DNA合成期M期：有丝分裂期G1期：有丝分裂完成至DNA合成开始的间隙期G2期：DNA复制结束至有丝分裂开始的间隙期G0期：某种原因导致细胞不再沿周期进行，进入休眠状态

215细胞一代时间(Cellgenerationtime)单个细胞两次连续分裂的时间间隔。需要的时间。4在对数生长期进行计算的细胞增加一倍所3群体倍增时间(Populationdoublingtime)

1克隆(Clone)单个细胞通过有丝分裂形成的细胞群体，它们的遗传特性相同。2细胞融合(Cellfusion)体外培养条件下，经化学试剂、病毒或物理方法诱发，使不同体细胞融合成杂交细胞(Hybrid)。3细胞汇合(Confluence)器皿中培养的细胞彼此汇合形成单层。

原代培养(Primaryculture)从直接取自生物体细胞、组织或器官开始的培养。传代培养(Passage)(Subculture)细胞从一个培养器皿转移至另一个培养器皿中培养。再培养(Reculture)单层细胞不经任何丢失而转移到新鲜培养基中的过程。

集落形成率(Platingefficiency)细胞接种到培养器皿内所形成的集落的百分率。单个细胞集落克隆形成率(Cloningefficiency)群体密度(Populationdensity)培养器皿内，每单位面积或体积中的细胞数(细胞数/cm2)。饱和密度(Saturationdensity)特定条件下，培养器皿中能达到的最高细胞数(细胞数/cm2或细胞数/cm3)。

培养基培养基2025/9/2510天然培养基1合成培养基2基本培养基(通用培养基)(MEM)3无血清培养基4无蛋白培养基5血清6基本培养基(通用培养基)完全培养基7

基本培养基的组分四大类物质无机盐氨基酸维生素碳水化合物pH指示剂酚红

常用基本培养基2025/9/2512常用基本培养基RPMI1640应用最广泛DMEM高糖型4500g/L葡萄糖，低糖型1000g/L葡萄糖HamF12无血清培养基常用的基础培养基199……

培养基的选择培养细胞的首选培养基常用培养基根据细胞株特点、实验需要选择用生长曲线、集落形成率等指标选择

培养基配制时的注意事项严格按说明书要求添加必要成分NaHCO3谷氨酰胺HEPES-----各成分顺序溶解配制培养基用水、器皿灭菌分装、保存

培养基添加成分2025/9/2515NaHCO31一般按说明书要求添加2封闭式培养用5.6%或7.4%液调节3谷氨酰胺4易降解，使用前添加5使用终浓度0.002mol/L6HEPES(羟乙基哌嗪乙硫磺酸)7主要作用为防止培养基pH迅速变动