产枯草芽孢杆菌实训报告.pptxVIP

生化工艺实训报告

产淀粉酶枯草芽孢杆菌斜面活化摇瓶发酵优化培养基及种子培养葡萄糖标准曲线的制备发酵参数的测定01.02.03.04.一产淀粉酶的枯草芽孢杆菌的优化

实验材料菌种：从土壤中分离产淀粉酶的枯草芽孢杆菌配方：牛肉膏蛋白胨培养基蒸馏水400ml、牛肉膏2g、蛋白胨4g、氯化钠2g、琼脂0.2g、PH7.0~7.2试剂：牛肉膏、氯化钠、氢氧化钠溶液、蛋白胨、琼脂、盐酸溶液03020104051、产淀粉酶芽孢杆菌斜面活化

制备培养基：依照培养基组成稀释后定容400ml，分装与6个摇瓶中，50ml。剩余溶液分装与6个试管中，均10ml，并加0.2g琼脂。灭菌：高压灭菌锅121摄氏度0.11MPa20~30min斜面摆放：灭菌后的试管静止冷却至50摄氏度左右，将试管的液面及搁置的试管斜面长度不超过试管总长一半，凝固后待用。斜面活化：在超净工作台中将保藏的芽孢杆菌接种置已制好的斜面上划线。恒温培养：恒温培养箱37摄氏度过夜培养进行活化实验内容

实验材料01试剂：牛肉膏蛋白胨氯化钠淀粉葡萄糖02仪器设备：分光光度仪、超净工作台、烧杯、摇瓶、电炉、斜面活化的菌种、牛肉膏蛋白胨液体培养基、玻璃棒等玻璃仪器03实验步骤：042、摇瓶发酵优化培养基

恒温水浴锅分光光度计

1、摇瓶发酵培养基优化

发酵优化方案葡萄糖g淀粉g蛋白胨g牛肉膏g氯化钠溶液ml蒸馏水mlPH值接种量%摇瓶装量方案12——20.050.51007.0~7.2250方案22——10.050.51007.0~7.2250方案3111.50.050.51007.0~7.2250方案41.50.51.50.050.51007.0~7.2250方案52——1.50.050.51007.0~7.2250方案62——1.50.050.51007.0~7.2450

依照优化培养基配方制备相应试剂，每个配方平行试验两次灭菌：将12个摇瓶与高压蒸汽灭菌锅内进行灭菌121摄氏度0.11MPa15~20min实验步骤摇瓶发酵培养基优化

确保在灭菌环境中进行注意事项：培养条件：37摄氏度摇床培养对培养基进行标注，以免混淆接种：选取生长状况良好的试管斜面进行接种，挑取活化菌接种到液体培养基中，平行6个种子培养验步骤葡萄糖标准试剂待用中DNS试剂的制备：称取3.25gDNS溶与热蒸馏水中，加入2mol/L氢氧化钠溶液162.5ml，再加入22.5ml丙三醇，摇匀，冷却后定容500ml，待用。在下述试管中分别加入DNS试剂2ml于沸水浴中加热2min进行显色，取出后立即冷却，各加入蒸馏水9.0ml，摇匀，在分光光度计中540nm波长处测定光吸收值。05以葡萄糖含量为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线3、葡萄糖标准曲线的制备

葡萄糖标准溶液管号葡萄糖标准液蒸馏水葡萄糖浓度OD540001.00010.20.80.40.02020.40.60.80.05030.60.41.20.06440.80.21.60.09051.002.00.127

葡萄糖标准曲线

实验步骤在超净工作台上将方案1、2、3、4、5均按2%接种量进行接种，在180r/min的摇床进行培养；方案6接种4%在120r/min的摇床上进行培养。每隔一小时进行取样（包含0小时），检测酶活、菌浓、及其PH值。根据各数据挑选最优培养方案。3、发酵参数的测定

STEP01STEP02将取样稀释后与分光光度计（波长600nm）测OD值，空白为蒸馏水。绘制生长曲线，横坐标为培养时间，纵坐标为菌浓。生长曲线绘制

生长曲线参数数据时间波长蛋白胨2g方案1蛋白胨1g方案2淀粉1g方案3淀粉0.5g方案4接种量2%方案5接种量4%方案60时600nm处OD值0.1540.090.1760.1920.0770.221时0.2220.170.2340.2280.1680.2462时0.2680.220.2460.4510.2460.3643时0.3080.2280.340.5520.260.3854时0.3360.2640.5850.5920.2920.396

生长曲线

No.3发酵液离心处理8000rpm5min1ml离心后的上悬液加入5ml1%淀粉溶液与37摄氏度水浴5min，然后沸水浴5min，终止反应。取上述溶液1ml加入DNS试剂2ml与沸水浴加热，2min进行显色反应，取出后迅速冷却，各加入9ml蒸馏水，摇匀，在540nm波长处测光吸收值。以发酵液加1%淀粉溶液直接加热，煮沸后再加2mlDNS试剂，作为空白。No.2No.1酶活测定

酶活测定参数数据时间蛋白胨2g方案1蛋白胨1g方案2淀粉1g方案3淀粉0.5g方案4接种量2%方案5接种量