第九章放免技术.pptVIP

“-”：无或仅见极微弱荧光。“+”：荧光较弱但清楚可见。“++”：荧光明亮。“+++”：耀眼强荧光。特异荧光强度“++”以上判定为阳性，对照光应呈“-”或“±”。根据呈++的血清最高稀释度判定特异性抗体效价。荧光抗体染色结果判断荧光抗体染色及结果判断第29页，共69页，星期日，2025年，2月5日荧光显微镜利用一定波长的激发光对样品进行激发，产生一定波长的荧光，对样品结构或其组分进行定性、定位、定量观察检测。四、荧光显微镜的基本结构第30页，共69页，星期日，2025年，2月5日光源：高压汞灯、氙灯滤光片：隔热、激发和吸收滤光片光路：透射光、落射光聚光器：明视野、暗视野和相差荧光聚光器镜头：消色差镜头荧光显微镜荧光显微镜的基本结构第31页，共69页，星期日，2025年，2月5日隔热滤光片：阻断红外线通过而隔热。激发滤光片：位于光源和物镜之间，能选择性地透过紫外线可见波长的光域，提供合适的激发光。吸收滤光片：位于物镜和目镜之间，阻断激发光而使发射的荧光透过，保护眼睛。荧光显微镜滤光片荧光显微镜的基本结构第32页，共69页，星期日，2025年，2月5日透射光：照明光线从标本下经聚光器透过标本进入物镜。落射光：照明光线从标本上经垂直照明器落射到标本，经标本反射进入物镜。透射荧光显微镜光路(a)落射荧光显微镜光路(b)荧光显微镜光路荧光显微镜的基本结构第33页，共69页，星期日，2025年，2月5日

第三节流式荧光免疫技术

第34页，共69页，星期日，2025年，2月5日

第四节荧光免疫分析的类型

第35页，共69页，星期日，2025年，2月5日荧光免疫分析的基本原理将抗原抗体反应与荧光物质发光分析相结合，用荧光检测仪检测抗原抗体复合物中特异性荧光强度，对液体标本中微量或超微量物质进行定量测定。第36页，共69页，星期日，2025年，2月5日荧光抗体技术荧光免疫测定均相荧光免疫测定（homogeneousfluorescenceimmunoassay）非均相荧光免疫测定（heterogeneousfluorescenceimmunoassay）荧光免疫技术荧光免疫技术是将抗原抗体反应的特异性与荧光技术的敏感性相结合，对抗原或抗体进行定性、定位或定量检测。荧光免疫技术的类型第37页，共69页，星期日，2025年，2月5日荧光免疫测定的方法类型非均相荧光免疫测定：时间分辨荧光免疫测定、荧光酶免疫测定均相荧光免疫测定：荧光偏振免疫测定第38页，共69页，星期日，2025年，2月5日自发荧光寿命短:1ns～10ns镧系元素寿命长:10μs～1000μs短寿命荧光完全衰变后再测定镧系元素特异荧光基本原理时间分辨检测原理示意图时间分辨一、时间分辨荧光免疫测定第39页，共69页，星期日，2025年，2月5日stokes位移:激发光谱和发射光谱的波长差镧系元素Stokes位移大(273nm)，激发光谱和发射光谱不重叠stokes位移基本原理时间分辨荧光免疫测定第40页，共69页，星期日，2025年，2月5日发射光谱带较窄：613nm±10nm，干扰少激发光谱带较宽：30nm～500nm，灵敏度高基本原理发射光谱和激发光谱时间分辨荧光免疫测定第41页，共69页，星期日，2025年，2月5日比活性：单位时间每个标记分子被探测的信号量荧光激发光源1000次/S激发，比活性提高基本原理荧光标记物的相对比活性时间分辨荧光免疫测定第42页，共69页，星期日，2025年，2月5日结合β-二酮体Eu3+解离酸性增强液荧光增强Eu3+标记抗原抗体复合物基本原理信号增强时间分辨荧光免疫测定第43页，共69页，星期日，2025年，2月5日镧系元素铕(Eu3+)（最常用）钐(Sm3+)铽(Tb3+)钕(Nd3+)镝(Dy3+)标记物荧光物质荧光寿命(ns)荧光物质荧光寿命(ns)非特异荧光背景1～10Sm3+-β-NTA65000人血清蛋白4.1Sm3+-PTA60000球蛋白3.0Eu3+-β-NTA714000细胞色素C3.5Eu3+-PTA925000FITC4.5Tb3+-PTA96000丹黄酰氯14Dy3+-PTA1000罗丹明B3.0常见荧光物质的荧光寿命时间分辨荧光免疫测定第44页，共69页，星期日，2025年，2月5日标记方法双功能螯合剂：1-（对-苯偶氮）-E