牙髓干细胞用于牙根再生和银屑病治疗的效果及机制研究.pdfVIP

中文摘要

间充质干细胞（MSC，mesenchymalstemcell）是一类多能成体干细胞，具

有分化、归巢、分泌细胞因子、免疫调节等能力，被广泛应用于组织再生以及免

疫性疾病治疗。牙髓干细胞（DPSC，dentalpulpstemcell）是一种外胚层MSC，

具有低免疫原性和高增殖活性，适合临床异体应用。本文围绕hDPSCs主要进行

了以下三个方面的研究:

首先，采用组织块联合酶消化的方法从牙髓中分离hDPSCs，对分离获得的

hDPSCs进行鉴定，结果表明hDPSCs阳性表达CD73、CD90和CD105，阴性表

达CD45、CD19、CD34、CD11b和HLA-DR，具有成骨、成脂分化能力，是一

种MSC。为探索hDPSCs大规模扩增的培养条件，本文研究了低氧培养对hDPSCs

的影响。将P3代hDPSCs在低氧条件下（5%氧浓度）培养到P6代，并对培养

后hDPSCs的表面标志、老化情况、增殖和分化能力进行分析。结果表明，低氧

培养能够提高hDPSCs干性标志STRO-1、OCT4的表达；减少衰老细胞数，抑

制衰老相关基因p53、TGF-β的表达；不影响hDPSCs的增殖活性；抑制hDPSCs

中成骨、成脂分化相关基因ALP、RUNX-2、PPAR-γ、FABP4的表达。为进一

步验证低氧培养对hDPSCs分化程度的影响，本研究分别在低氧和常氧条件下对

P3代hDPSCs进行了成骨、成脂分化诱导，结果表明低氧培养能够抑制诱导形

成的钙结节和脂滴的数量，抑制诱导提高的ALP、RUNX-2、PPAR-γ、FABP4

的表达；为明确低氧培养对hDPSCs分化能力的影响，本研究将常氧和低氧培养

至P6代的hDPSCs均置于常氧条件下进行成骨、成脂分化诱导，结果表明低氧

培养的hDPSCs的成骨、成脂分化水平高于常氧培养的hDPSCs。

其次，本文探索了hDPSCs用于组织再生和免疫性疾病治疗的可行性。

利用组织工程的概念，将接种hDPSCs的支架材料构建成牙根形态的三明治

结构，研究hDPSCs能否作为单一种子细胞用于牙根再生。首先制备所用的材料：

采用维生素C（VC）诱导的方法制备了hDPSCs膜片；采用浸泡联合超声脱钙

的方法制备了结构无损伤但脱钙更完全的处理牙本质基质（TDM，treateddentin

matrix），并接种hDPSCs；4℃融化Matrigel，混入hDPSCs。然后利用浸提液与

直接接触的方法评估hTDM和Matrigel的生物相容性及诱导再生能力。结果表

明，两种材料的条件培养基均不损伤hDPSCs的增殖能力；hDPSCs能够在hTDM

表面黏附并增殖成为细胞薄膜，在Matrigel胶内伸展、增殖、连接成立体网状结

构；hTDM和Matrigel能够促进hDPSCs中成骨、成牙、成血管、成神经分化相

关基因的表达。最后将hDPSCs膜片、hTDM/hDPSCs、Matrigel/hDPSCs构建的

三明治结构移植到免疫缺陷小鼠的背部，12w后取出进行组织学分析，能够观

察到再生的类牙周膜、前期牙本质以及含神经/血管的类牙髓结构，免疫组化结

果表明，再生的组织中阳性表达人MIT（Mitochondria）、DMP-1（Dentinmatrix

protein1）、DSPP（dentinsialophosphoprotein）、CD31和β3-TUBULIN蛋白。

除了再生能力，本文利用外周血单个核细胞（PBMC，peripheralblood

mononuclearcell）共培养的方法研究了hDPSCs的免疫调节能力，结果表明

hDPSCs能够抑制PBMCs的增殖，抑制Th1、Th17的分化，促进Treg的分化，

适用于Th（Thelper）细胞相关的炎症性疾病的治疗。银屑病是一种Th1、Th17

异常活化的免疫性疾病。本文利用国产咪喹莫特（IMQ，imiquimod）建立了银

屑病小鼠模型，并对银屑病小鼠进行了hDPSCs治疗。结果表明hDPSCs可以减

轻银屑病小鼠鳞屑、红肿、炎性浸润、角化不全、过度角化、表皮增厚等症状，

抑制Th1、Th17相关的炎症因子表达，包括IFN-γ、TNF-α、IL-17A、IL-17F、

IL-23、T-bet、RORγt等