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PCR技术在中药鉴定中的应用

摘［要］以聚合酶链式反应P（CR）技术为支撑的现代分生物学技术，包括随机

扩增多态性DNAR（APD）技术、ISSR-PCR技术、PCR-RFLP技术、mRNA差异显

示技术、基因测序技术及基因芯片技术在中药鉴定中的应用，现代分生物学技

术的蓬勃兴起将极大地推动中药鉴定的发展。

关［键词］PCR技术；分生物学技术；中药鉴定

千百年来，中药在维系国人的身体健康方面发挥了不可替代的作用。中药

包括植物药、动物药和矿物药，品种繁多，加之各地的用药品种和用药习惯不尽

相同，同名异物和同物异名现象屡见不鲜。为规范药材市场、鉴定中药真伪优

劣，确保中药的质量与疗效，建立一套准确、简捷、迅速的鉴定方法迫在眉睫。

近年来分生物学的发展突飞猛进，特别是聚合酶链式反应P（CR）技术的问世,

推动分生物学的各个领域向纵深发展川。基于PCR技术的现代分生物学操

作在中药鉴定中得到应用，以其独具的准确性和可靠性，弥补了传统中药鉴定中

的许多不足，展现出其他方法难以比拟的优势。本文以PCR技术为切入点，着

重介绍目前在中药鉴定中运用较多的几种分生物学操作技术，希望能够抛砖引

玉，合众人之力增加中药鉴定中的现代元素，推动中药鉴定方法的改进与革新。

1PCR技术概述

PCR技术由美国Karray等学者于1985年首创，并由美国Cetus公司开

发研制。PCR技术原理是根据已知DNA片段序列，人工合成与该DNA两条链

末端互补的寡核甘酸引物,在酶促作用下将待检DNA序列进体外扩增。PCR反

应体系基本成分包括模板DNA（待扩增DNA）、引物、4种脱氧

核甘酸d（NTPs）、DNA聚合酶和适宜的缓冲液。多聚酶链式反应p（olymerase

chainreaction,PCR）的原理类似于DNA的天然复制过程。在待扩增的DNA片

段两侧和与其两侧互补的两个寡核甘酸引物，依赖于DNA聚合酶的酶促合成反

应。经变性、退火和延伸若干循环后，DNA扩增2n倍。变性是加热使模板DNA

在高温下9（4C）变性，双链间的氢键断裂而形成两条单链的过程；退火是使

溶液温度降至50~60℃,模板DNA与引物按碱基配对原则互补；延伸是在DNA

聚合酶的作用下，以单链DNA为模板，利用四种脱氧核甘酸，按5-3方

向复制出与模板互补的DNA链，上述三步为一个循环。每经过一个循环，样品

中的DNA量应增加一倍，新形成的链又可作为新一轮循环的模板。分子生物学

技术的核心是聚合酶链反应P（CR）,由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反

应组成一个周期，循环进，使目的DNA得以迅速扩增，能在最短的时间内扩

增。由此衍生出新PCR技术，在医学上的临床诊断和治疗中意义重大。PCR技术

使人们能够在体外进DNA的复制，它的意义在于DNA是遗传密码的载体，

具有相对的遗传稳定性，每种生物都有其固定的遗传密码。只要得到某种物质

的微量细胞并将其细胞内的遗传物质提取出来，再通过PCR技术将其扩增，

就会准确无误地判断该物质，进而判断该物种。PCR技术以其独具的可靠性和

准确性，在中药材基原鉴定和真伪鉴别方面拥有广阔的应用空间。

2基于PCR技术的现代分子生物学技术

PCR技术是现代分子生物学的基石，该项技术的世具有划时代的意义。以

PCR技术为基础，分子生物学领域衍生出多种新的实验操作技术