梁版蛋白质和蛋白质药物课件.pptVIP

CCα3Cα2Cα1CNNHHHOOR肽平面1肽平面2肽平面及其旋轉ψΦα-螺旋(α-helix)β-折疊(β-pleatedsheet)β-轉角(β–turnorβ-bend)無規捲曲(randomcoil)肽單元上Cα所連的兩個單鍵的自由旋轉角度，決定兩個相連肽單元的相對空間位置，由於旋轉角度的不同，形成了幾種二級結構形式：左手螺旋與右手螺旋α螺旋主要的結構特點右手型α螺旋結構模型α螺旋主要的結構特點俯視圖二級結構（?-螺旋、分子內氫鍵)多肽鏈?-折疊形構象*α-helix：◆以α-碳原子為轉捩點，以肽鍵平面為單位，盤曲成右手螺旋狀的結構。◆螺旋上升一圈含3.6個氨基酸殘基，螺距0.54nm◆氨基酸的側鏈伸向螺旋的外側。◆螺旋的穩定是靠氫鍵。氫鍵方向與長軸平行。結構特點氫鍵?-螺旋（1）螺旋走向，穩定以氫鍵連接，氫鍵與軸平行。（2）側基R伸向螺旋外側。（3）棒狀結構，高度壓縮，緊密排列。（4）規律排列（5）由1條充分伸展的肽鏈的肽鍵平面折疊成的右手螺旋。（6）每隔3.6個氨基酸殘基螺旋上升一圈，螺距0.54nm。（7）1個螺圈內有13個原子。四種不同的α-螺旋模型三股螺旋又稱膠原螺旋、超螺旋膠原纖維中原膠原蛋白分子的排列膠原蛋白的三股螺旋

2、b-折疊(b-片層)b-折疊(b-片層)C-末端分析肼解法還原法羧肽酶法氨基酸末端分析肼解法氨基酸末端分析這是測定C-末端最常用的方法。將多肽溶於無水肼中，100℃下反應5~10小時，結果羧基末端氨基酸以游離氨基酸釋放，而其餘肽鏈部分與肼生成氨基酸醯肼化合物。 反應中生成的氨基酸醯肼化合物可與苯甲醛作用變為水不溶性的二苯基衍生物而沉澱。 上清液中游離的羧基末端氨基酸可借助於DNFB法或DNS法以及層析技術進行鑒定。 如果羧基末端氨基酸側鏈是帶有醯胺如天冬醯胺和穀氨醯胺，或者是半胱氨酸，則肼解時被破壞不能產生游離的羧基末端氨基酸。 精氨酸會轉變成鳥氨酸。 此外肼解時注意避免任何少量的水解，以免釋出的氨基酸混淆末端分析。羧肽酶法主要方法根據氨基酸釋放的動力學曲線，可確定該肽鏈的C端氨基酸順序。氨基酸末端分析 羧肽酶法： 羧肽酶可以專一性地水解羧基末端氨基酸。根據酶解的專一性不同，可區分為羧肽酶A、B和C。應用羧肽酶測定末端時，需要事先進行酶的動力學實驗，以便選擇合適的酶濃度及反應時間，使釋放出的氨基酸主要是C末端氨基酸。目前最常用有羧肽酶A和B。 羧肽酶A：當C端為Lys、Arg和Pro時，或倒數第二個氨基酸為Pro時，該酶均不能作用。 羧肽酶B：只能水解以鹼性氨基酸Lys、Arg為C端殘基的肽鍵，且倒數第二個氨基酸為Pro時，該酶不能作用。羧肽酶法A-----B氨基酸末端分析肽鏈間的結合非共價鍵血紅蛋白（四聚體）烯醇化酶（二聚體）共價鍵結合胰島素免疫球蛋白等蛋白質中肽鏈的拆離非共價鍵連接的多肽鏈溫和條件下可以解離通過二硫鍵連接的多肽鏈需要較強的條件將二硫鍵切斷還原法氧化法蛋白質中肽鏈的拆離還原法將二硫鍵還原成巰基蛋白質中肽鏈的拆離還原法蛋白質中肽鏈的拆離還原法為防止巰基重新氧化，可用碘乙酸、碘乙醯胺等使其烷化蛋白質中肽鏈的拆離氧化法二硫鍵用過甲酸氧化為磺酸基而拆開蛋白質中肽鏈的拆離氨基酸組成分析化學裂解法酶水解法溴化氰法羥胺法肽鏈的部分降解及肽片斷的分離溴化氰法溴化氰對甲硫氨酸羧基形成的肽鍵特異肽鏈的部分降解及肽片斷的分離羥胺法羥胺能專一地裂解Asn-Gly的肽鍵，酸性條件下裂解Asn-Pro肽鍵。肽鏈的部分降解及肽片斷的分離酶水解法常用的酶有:胰蛋白酶：Lys，Arg胰凝乳蛋白酶：Phe，Try，Tyr胃蛋白酶：Phe，Try，Tyr，Leu嗜熱菌蛋白酶：Phe，Try，Tyr，Leu，Met肽鏈的部分降解及肽片斷的分離Edman降解法DNS-Edman方法順序分析的最主要的方法肽段氨基酸順序測定及肽段重疊使測定靈敏度，進一步提高大分子多肽氨基酸順序確定有一條肽,分別用A法和B法裂解,得到不同的小肽片段並測得順序:A法:蛋-笨丙,甘-絲,纈-賴-酪-丙B法:酪-丙-蛋-苯丙,甘-絲-纈-賴單獨用A法或B法都很難確定多肽的順序,綜合兩法,找到重疊順序,就可推測出正確順序.重疊順序:纈-賴-酪-丙多肽順序:甘-絲-纈-