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第1页,共19页,星期日,2025年,2月5日3.运载体(1)作用:①作为运载工具,将目的基因转移到宿主细胞内。②利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。(2)种类:质粒、λ噬菌体的衍生物和动植物病毒等。(3)条件:①有一个或多个限制酶切位点②能自我复制③有标记基因(4)一般来说,天然载体往往不能满足人类的所有要求,因此在基因工程中,对某些天然的载体进行人工改造。第2页,共19页,星期日,2025年,2月5日4.基因工程中形成的重组DNA是DNA分子片段的连接,而不是合成DNA分子或转录合成mRNA的过程5.DNA连接酶:不需要模板DNA聚合酶:需要模板DNA复制时都形成磷酸二脂键6.基因操作程序:Ⅰ获取目的基因Ⅱ构建表达载体(核心)Ⅲ导入受体细胞Ⅳ目的基因的检测与鉴定第3页,共19页,星期日,2025年,2月5日Ⅰ获得目的基因(1)基因组文库(所有的)部分基因文库(部分的),如cDNA文库(2)PCR技术扩增目的基因原理:DNA复制指数方式增加需要:模板DNA,原料(游离的四种脱氧核苷酸),引物,DNA聚合酶(3)人工合成(基因较小)化学合成:DNA合成仪(已知序列)反转录法:未知序列第4页,共19页,星期日,2025年,2月5日Ⅱ构建表达载体(核心):目的基因、启动子、终止子、标记基因Ⅲ导入受体细胞(1)植物细胞农杆菌转化法:双子叶植物、裸子植物的体细胞或受精卵基因枪法花粉管通道法(2)动物细胞:显微注射技术受体细胞:受精卵(a含有目的基因表达所需的物质;b具有全能性)(3)微生物细胞:原核生物(繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少)作为受体细胞大肠杆菌:Ca2+处理细胞(感受态细胞)Ⅳ目的基因的检测与鉴定1)检测:DNA分子杂交技术(原理:碱基互补配对)①目的基因作探针②转录出mRNA③翻译成蛋白质:抗原抗体杂交2)鉴定:个体生物学水平第5页,共19页,星期日,2025年,2月5日7.逆转录形成的目的基因不含内含子原因:mRNA形成时切掉了内含子转录的RNA内含子:能转录不能翻译外显子:能转录能翻译真核生物基因编码区:内含子和外显子原核和真核生物的非编码区:对遗传起调控作用(启动子和终止子)8.植物基因工程技术①提高农作物的抗逆能力②改良农作物的品质③利用植物生产药物第6页,共19页,星期日,2025年,2月5日9.杀虫的基因:Bt毒蛋白基因(我国转基因抗虫棉)、蛋白酶抑制剂基因、淀粉酶抑制剂基因、植物凝集素基因10.病原微生物:病毒、真菌、细菌等。11.转基因玉米:赖氨酸含量比对照提高30%12.动物基因工程:导入生长素基因---提高生长速度导入肠乳糖酶基因---改善畜产品品质生产药物---乳腺生物反应器或乳房生物反应器优点:易提取、产量高、质量好、成本低转基因动物作器官移植的供体优点:抑制抗原基因的表达、或除去抗原决定的基因、无免疫排斥反应第7页,共19页,星期日,2025年,2月5日13.工程菌第一种基因工程药物---重组人胰岛素细胞因子、抗体、疫苗、激素等。我国生产:白细胞介素-2、干扰素(糖蛋白,为我国第一个批量生产的药物)、乙肝疫苗14.体外基因治疗和体内基因治疗:都处于初期临床试验阶段15.基因工程是在两个物种间转移基因,克服了两个物种间由于生殖隔离不能进行基因交流的障碍,能定向培育生物新品种。16.基因重组:1)有性生殖时:非等位基因的重新组合2)DNA的拼接技术---基因工程17.基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质18.蛋白质工程:第二代基因工程基因修饰或基因合成第8页,共19页,星期日,2025年,2月5日第二章细胞工程1.植物的组织培养离体的组织、器官或细胞愈伤组织植物体2.植物体细胞杂交技术生殖方式:无性生殖脱分化再分化外植体固体培养基营养:蔗糖、矿质元素(无机盐)激素:生长素、细胞分裂素(也有赤霉素)注:愈伤组织之后需要给予光照条件原理:植物细胞的全能性去除细胞壁的方法:酶解法(纤维素酶和果胶酶)诱导原生质体融合的方法:物理法:离心、振动和电激化学法:聚乙二醇(PEG)生长素含量>细胞分裂素:诱导脱分化和根原基形成生长素含量细胞分裂素:诱导再分化和芽原基形成一、植物细胞工程第9页,共19页,星期日,2025年,2月5日杂种细胞形成的标志:生成新的细胞壁植物体细胞杂交的原理:细胞膜的流动性、植物细胞的全能性意义:克服不同物种远缘杂交的
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