化药二部品种重组人生长激素质量修订与检测方法优化.pdfVIP

重组人生长激素

ChongzuRenShengzhangjisu

RecombinantHumanGrowthHormone

书页号：2005年版二部－413

[修订]

重组人生长激素CHNOS22,125

99015282623007

本品是由191个氨基酸残基组成的蛋白质，可加适量赋形剂或稳定剂。按无水物计，

每1mg含重组人生长激素的量应不少于0.90mg，每1mg重组人生长激素相当于3.0IU。

本品由重组技术生产，必须在生产过程中，用体内生物测定方法测定其生物效价

（附录XIIP），每1mg蛋白效价少于2.5单位（每一年测定一次）。

【鉴别】删去原鉴别（1），原鉴别（3）修订为：

（2）取重组人生长激素对照品，用三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH7.5)制成每1ml中含

2mg的溶液，取此液300μl、胰蛋白酶溶液[取经TPCK处理的胰蛋白酶适量，用三羟甲基氨

基甲烷缓冲液(pH7.5)制成每1ml中含2mg的溶液]20μl与三羟甲基氨基甲烷缓冲液

(pH7.5)300μl，混匀，置37℃水浴中4小时，立即置-20℃终止反应，作为对照品溶液。取本

品，用三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH7.5)制成每1ml中含2mg的溶液，取此液300μl，同法制

备，作为供试品溶液；另取不加酶的供试品溶液作为空白溶液；照高效液相色谱法(附录ⅤD)试

验，以硅烷键合硅胶为填充剂(5～10μm)；以0.1%三氟醋酸溶液为流动相A，含0.1%三

氟醋酸的90%乙腈溶液为流动相B，进行梯度洗脱。流速为每分钟1.0ml；柱温为35℃；检

测波长为214nm。

时间(分钟)流动相流动相

A(%)B(%)

01000

208020

457525

705050

752080

取空白溶液，对照品溶液和供试品溶液各100μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，

扣除空白溶液峰后供试品的肽图谱应与重组人生长激素对照品的肽图谱一致。

【检查】相关蛋白质取本品适量，用三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液(pH7.5)制成每

1ml中含重组人生长激素2mg的溶液，作为供试品溶液；另取重组人生长激素对照品适量，

同法，作为对照品溶液。照高效液相色谱法(附录ⅤD)测定，以硅烷键合硅胶为填

充剂(5～10μm)；三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH7.5)-正丙醇(约为71∶29)为流动相，调节流动

相中正丙醇比例使重组人生长激素主峰保留时间为30～36分钟；流速为每分钟0.5ml；柱

Recombinanthuman

growthhormone