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第1页，共13页，星期日，2025年，2月5日主要内容一、实验目的二、实验原理三、实验步骤四、注意事项五、数据处理第2页，共13页，星期日，2025年，2月5日一、实验目的1、学习高效液相色谱法分离咖啡因的原理。2、练习高效液相色谱仪的基本操作。3、掌握高效液相色谱法进行定性及定量分析的基本方法。第3页，共13页，星期日，2025年，2月5日二、实验原理咖啡中含咖啡因约1.2～1.8%，茶叶中含2.0～4.7%，可乐饮料和APC药片中均含有咖啡因。其分子式为C8H10O2N4，结构式：定量测定咖啡因的传统分析方法是采用萃取分光光度法。第4页，共13页，星期日，2025年，2月5日二、实验原理利用混合物不同组分在固定相和流动相中分配系数(或吸附系数、渗透性等)的差异，使不同组分在作相对运动的两相中进行反复分配，实现分离的分析方法。色谱法第5页，共13页，星期日，2025年，2月5日色谱法分类色谱法气体超临界流体气固色谱（GSC）气液色谱（GLC）超临界流体色谱(SFC)胶束电动色谱（MEKC）液液色谱（LLC）吸附色谱（LSC）尺寸排阻色谱(SEC)键合相色谱(BPC)离子交换色谱(IEC)亲和色谱(AC)毛细管电色谱(CEC)液固色谱（LSC）液体第6页，共13页，星期日，2025年，2月5日高压泵流动相溶剂废液色谱柱进样口检测器高效液相色谱仪第7页，共13页，星期日，2025年，2月5日保留值定性分析第8页，共13页，星期日，2025年，2月5日校准曲线法定量分析或第9页，共13页，星期日，2025年，2月5日三、实验步骤1、溶液的配制：分别取1、2、3、4、5mL100μgmL-1的咖啡因标准储备液，以超纯水稀释至50mL，即得到20、40、60、80、100μgmL-1的标准溶液。2、绘制标准曲线：待基线平稳后，吸取系列标准溶液，分别进样分析，绘制标准曲线。3、样品测定：吸取待测样品进样分析，根据其峰面积，依据标准曲线计算样品中咖啡因含量。第10页，共13页，星期日，2025年，2月5日
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