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新购细胞株的处理

一、冷冻细胞活化︰

1.收到细胞株冷冻包裹时，应检查细胞株冷冻管是否有结冻的情形。若有，应立即细胞株者

方面，以便细胞株出现问题时明确责任。

2.收到细胞株后应尽速开始培养，或先置于-70°C，隔天再移到液氮保存。

3.依据细胞株资料单指定的培养基种类、种类和其它指定的成份和比例，培养基。

4.冷冻细胞解冻程序：

1)将冷藏的培养基置于37°C(或其它适当的培养温度)水浴箱中回温。回温后，以70%乙醇擦

拭之，移入超净台内。

2)自液氮槽或-80°C冰箱取出冷冻管，立即放入37°C水浴箱中快速解冻，水面高度不可接近或

高过冷冻管之盖沿，否则易发生污染。轻摇冷冻管使其在1~3分钟内全部融化，以70%乙醇

擦拭冷冻管外部，移入超净台内。

3)依据细胞种类和浓度，于超净台内取适量培养基加至适当的培养瓶中。缓慢加入已解冻的细胞

[注二]

悬浮液，与培养基混合均匀后，放入培养箱培养。

注意事项：

注一：对细胞而言，胎牛(fetalbovineserum)、小牛(calfserum)和马(horseserum)彼

此之间差异极大，请务必依据细胞株资料单指定的种类培养之。绝大多数之细胞均

无法立即适应不同之基础培养基或不同之种类，若因实验需要，必须有所不同时，务

必以缓慢比例渐次改变培养基组成，确定细胞适应后，方进行所需的实验。

注二：对绝大多数细胞而言，1%以下的冷冻保护剂(DMSO)，不会对细胞贴附或活化产生不

良的影响，不需立刻由解冻细胞中去除，待第二天确定细胞生长或贴附良好后再去除即

可。惟有极少数因对DMSO敏感或会造成细胞分化的细胞，需立即去除DMSO者，则

可将之细胞悬浮液放入5~10ml培养基中，离心300xg(约1000rpm)，5分钟后，

移去上清液，加入适量新鲜培养基，将细胞均匀混合后，转移至培养瓶中，再放入培

养箱内培养。

二、T25培养瓶中的吸附型细胞的处理：

Handlingofnewly

purchasedcelllines

1.Frozencellactivation..

1.Whenreceivingthecelllinefreezingpackage,youshouldcheckwhetherthecelllinefreezingtubeis

frozen.Ifso,thecelllineprovidershouldbenotifiedimmediatelysothatresponsibilitiescanbeclarified

whenproblemsarisewiththecellline.

2.Startculturingthecelllinesassoonaspossibleafterreceivingthem,orcethemat-70°Cfirstand

thenmovethemtoliquidnitrogenforstoragethenextday.

Prepar