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2025年核酸pcr实验室考试题及答案

一、单项选择题（每题2分，共30题，计60分）

1.核酸PCR实验室分区中，产物分析区的核心功能是？

A.样本接收与处理

B.扩增反应体系配制

C.PCR扩增产物检测

D.核酸提取与纯化

答案：C

2.下列关于PCR引物设计的描述中，错误的是？

A.引物长度建议18-25个核苷酸

B.引物GC含量应控制在40%-60%

C.引物3端避免连续3个G/C

D.引物5端必须与模板严格互补

答案：D

3.实时荧光PCR实验中，Ct值的定义是？

A.荧光信号达到设定阈值时的循环数

B.扩增曲线平台期的荧光强度值

C.基线期的平均荧光值

D.扩增效率达到90%时的循环数

答案：A

4.核酸提取过程中，使用异硫氰酸胍的主要作用是？

A.裂解细胞膜并抑制核酸酶

B.沉淀蛋白质

C.中和溶液pH值

D.提高核酸溶解度

答案：A

5.PCR实验室空气流向应严格遵循？

A.产物分析区→扩增区→制备区→样本处理区

B.样本处理区→制备区→扩增区→产物分析区

C.制备区→样本处理区→扩增区→产物分析区

D.产物分析区←扩增区←制备区←样本处理区

答案：D

6.检测新型冠状病毒核酸时，选择ORF1ab和N基因双靶标的主要目的是？

A.提高检测灵敏度

B.降低检测成本

C.避免引物二聚体干扰

D.减少假阴性概率

答案：D

7.以下哪种情况会导致PCR实验出现假阴性结果？

A.样本核酸提取时被污染

B.扩增仪温度校准偏差（退火温度偏高）

C.引物浓度过高

D.荧光探针标记错误

答案：B

8.实时荧光PCR仪的荧光通道校准应至少多久进行一次？

A.每周

B.每月

C.每季度

D.每半年

答案：C

9.核酸检测实验室生物安全柜使用完毕后，需保持紫外灯照射的时间是？

A.5分钟

B.15分钟

C.30分钟

D.60分钟

答案：C

10.下列关于PCR反应体系配制的操作规范中，错误的是？

A.使用带滤芯的移液器吸头

B.不同批次试剂混合使用前需做兼容性验证

C.配制完成后立即进行扩增

D.试剂从冰箱取出后直接使用

答案：D

11.检测样本保存温度要求为-20℃时，正确的保存方式是？

A.短期保存（7天）可置于普通冰箱冷冻层

B.长期保存需使用-80℃超低温冰箱

C.反复冻融不超过3次

D.保存容器可使用普通离心管

答案：B

12.扩增产物污染的主要来源是？

A.样本间交叉污染

B.气溶胶扩散

C.试剂污染

D.仪器残留污染

答案：B

13.评价PCR检测方法特异性的金标准是？

A.与已验证方法的符合率

B.检测不同病原体的交叉反应

C.最低检测限（LOD）

D.重复性试验CV值

答案：B

14.核酸提取仪日常维护中，需要重点检查的项目不包括？

A.机械臂运动精度

B.磁珠残留量

C.加样针堵塞情况

D.实验室温湿度

答案：D

15.新型冠状病毒核酸检测中，弱阳性样本的处理流程是？

A.直接报告阳性

B.重新提取原样本核酸并复检

C.稀释样本后再次检测

D.报告阴性

答案：B

16.PCR实验室压差控制要求中，相邻区域压差应至少达到？

A.5Pa

B.10Pa

C.15Pa

D.20Pa

答案：B

17.下列关于内参基因（内标）的描述中，错误的是？

A.用于监控核酸提取效率

B.应与靶基因扩增效率一致

C.可使用人源管家基因（如GAPDH）

D.内参阴性提示样本可能被污染

答案：D

18.扩增仪温度均匀性验证时，应选择的检测点数量是？

A.3个（中心+四角任选2个）

B.5个（中心+四角）

C.7个（中心+上下左右前后）

D.9个（3×3矩阵）

答案：B

19.核酸检测实验室医疗废物处理时，感染性废物的包装应使用？

A.黄色医疗废物袋，双层包装

B.黑色普通垃圾袋，单层包装

C.红色危险废物袋，单层包装

D.蓝色可回收袋，双层包装

答案：A

20.实时荧光PCR实验中，基线范围通常设定为？

A.1-3循环

B.3-15循环

C.15-30循环

D.30-40循环

答案：B

21.下列关于引物二聚体的描述中，正确的是？

A.会导致Ct值假性降低

B.扩增曲线呈典型S型

C.溶解曲线显示单一峰

D.可通过提高退火温度减少

答案：D

22.核酸提取过程中，75%乙醇洗涤的主要目的是？

A.裂解细胞

B.沉淀核酸

C.去除盐离子和杂质

D.灭活病毒

答案：C

23.PCR实验室人员培训的重点内容不包括？

A.生物安全法律法规

B.仪器操作SOP

C.实验室管理体系文件

D.临床疾病诊断知识

答案：D

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