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2025年核酸理论考试题及答案

一、单项选择题（每题2分，共40分）

1.以下关于核酸检测中逆转录酶的描述，正确的是：

A.仅能以RNA为模板合成DNA

B.具有3→5外切酶活性

C.常用的M-MLV逆转录酶热稳定性高于AMV

D.逆转录反应中不需要引物参与

答案：A

解析：逆转录酶以RNA为模板合成cDNA（A正确）；多数逆转录酶无3→5外切酶活性（B错误）；AMV逆转录酶热稳定性高于M-MLV（C错误）；逆转录需要特异性引物或随机引物（D错误）。

2.实时荧光定量PCR（qPCR）中，SYBRGreenI染料的作用机制是：

A.与双链DNA小沟结合发出荧光

B.与单链DNA特异性杂交后发光

C.通过水解探针释放荧光基团

D.仅在PCR延伸阶段与DNA结合

答案：A

解析：SYBRGreenI通过嵌入双链DNA小沟发出荧光（A正确）；单链DNA无此特性（B错误）；水解探针属于TaqMan技术（C错误）；染料在退火和延伸阶段均与双链DNA结合（D错误）。

3.核酸提取过程中，异硫氰酸胍的主要作用是：

A.裂解细胞膜并抑制核酸酶

B.沉淀蛋白质

C.中和核酸负电荷

D.结合磁珠表面

答案：A

解析：异硫氰酸胍是强变性剂，可裂解细胞并抑制RNase/DNase活性（A正确）；沉淀蛋白质多通过高盐或离心（B错误）；中和电荷常用盐离子（C错误）；磁珠结合依赖硅羟基（D错误）。

4.核酸检测实验室分区中，以下操作应在扩增区进行的是：

A.样本接收与登记

B.提取核酸的加样

C.PCR反应体系配制

D.扩增产物的检测

答案：D

解析：样本接收在样本处理区（A错误）；核酸加样在提取区（B错误）；体系配制在试剂准备区（C错误）；扩增及检测在扩增区（D正确）。

5.关于核酸检测质量控制，以下说法错误的是：

A.阴性对照应无扩增曲线

B.阳性对照Ct值应在实验室设定的有效范围内

C.内参基因Ct值异常提示样本抑制物存在

D.弱阳性样本可直接报告“阳性”

答案：D

解析：弱阳性样本需重复检测确认（D错误）；其余选项均符合质量控制要求（A、B、C正确）。

6.新型冠状病毒（SARS-CoV-2）核酸检测中，常用的靶标基因不包括：

A.ORF1ab

B.N基因

C.E基因

D.gag基因

答案：D

解析：gag基因是HIV的靶标（D错误）；ORF1ab、N、E为SARS-CoV-2常用靶标（A、B、C正确）。

7.核酸检测样本保存条件错误的是：

A.血清样本4℃保存不超过72小时

B.咽拭子样本-20℃可保存1个月

C.全血样本室温放置不超过4小时

D.提取后的核酸-80℃可保存6个月

答案：C

解析：全血样本需4℃保存，室温放置易导致细胞裂解释放核酸酶（C错误）；其余保存条件符合规范（A、B、D正确）。

8.以下哪种情况会导致qPCR出现“假阴性”结果？

A.样本中存在PCR抑制物

B.引物浓度过高

C.扩增循环数设置过多

D.荧光采集通道错误

答案：A

解析：抑制物（如血红蛋白、肝素）会抑制酶活性，导致扩增失败（A正确）；引物浓度过高可能非特异性扩增（B错误）；循环数过多可能出现拖尾（C错误）；通道错误影响结果判读但非假阴性（D错误）。

9.核酸提取仪的磁珠法与柱提法相比，优势在于：

A.提取核酸纯度更高

B.操作自动化程度更高

C.适用于微量样本

D.无需离心步骤

答案：B

解析：磁珠法更易实现自动化（B正确）；柱提法纯度更高（A错误）；两者均适用于微量样本（C错误）；磁珠法需磁力分离，仍需离心替代步骤（D错误）。

10.关于核酸检测结果判读，正确的是：

A.Ct值≥40可直接报告“阴性”

B.单靶标阳性需结合临床综合判断

C.内参基因无扩增提示仪器故障

D.弱阳性样本Ct值应＞35

答案：B

解析：单靶标阳性可能为污染或交叉反应，需复核（B正确）；Ct≥40需结合阴性对照判断（A错误）；内参无扩增提示样本质量问题（C错误）；弱阳性Ct值通常在30-37之间（D错误）。

11.以下不属于核酸扩增技术的是：

A.LAMP（环介导等温扩增）

B.NASBA（核酸序列依赖性扩增）

C.SouthernBlot（Southern杂交）

D.RPA（重组酶聚合酶扩增）

答案：C

解析：SouthernBlot是杂交技术，非扩增（C错误