第二章--微生物的纯培养和显微技术.pptVIP

第二章微生物的纯培养

和显微技术;微生物

特点;培养物（culture）:

指在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体。

纯培养物（pureculture）：

微生物学中把从一个细胞或一群相同的细胞经过培养繁殖而得到的后代，称纯培养。所得培养物称为纯培养物。;第一节微生物的分离和纯培养;一、无菌技术(aseptictechnique);控制有害微生物主要有以下几种措施;1、微生物培养的常用器具及其灭菌;指熔化的固体培养基倒入无菌平皿，冷却凝固后，盛有固体培养基的平皿。;????????????????????????????火焰灼烧法

干热灭菌法

烘箱内热空气灭菌法

高温灭菌巴氏消毒法

常压下煮沸消毒法

间歇灭菌法

湿热灭菌法

常规加压灭菌法

（高压蒸汽灭菌）

连续加压灭菌法;常用的灭菌方法：

高温干热灭菌（易燃物品不宜使用！）

高压蒸汽灭菌（最常用！）

;高压蒸汽灭菌锅;2、接种操作;2、接种操作;2、接种操作;2、接种操作;2、接种操作;;双管移植法;二、用固体培养基分离纯培养;菌落照片;;几种菌落;菌苔照片;不同微生物在特定平板培养基上生长，形成的菌落或菌苔一般具有稳定的特征，如形状、颜色等，可以成为对某种微生物进行分类、鉴定的重要依据。;金黄色葡萄球菌在血琼脂平板表面形成的菌落;同一种细菌在不同培养平板上形成不同特征菌落;用接种环沾少许待分离的材料，在培养基表面进行多次平行划线，使微生物细胞分开生长以获得微生物纯培养的过程。;

a:用接种环取一滴或少量待培养物在1处划线，接种环灭菌后,转动平板在2处划线,再对接种环灭菌后在3处划线。?

?b:对平板培养后各处的菌落情况。;2、稀释倒平板法（pourplate）;2、稀释倒平板法（pourplate）;3、涂布平板法（spreadplate）;倾注平板法;先将一系列盛无菌琼脂培养基的试管加热使琼脂熔化后冷却并保持在50℃左右，将待分离的材料用这些试管进行梯度稀释，试管迅速摇匀，冷凝后，在琼脂柱表面倾倒一层灭菌液体石蜡和固体石蜡的混合物，将培养基和空气隔开。培养后，菌落形成在琼脂柱的中间。;三、用液体培养基分离纯培养(常用稀释法);四、单细胞（孢子）分离;采用显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养的方法。该方法要在显微镜下进行。

毛细管法：用毛细管提取微生物个体，适合于较大微生物。

显微操作仪：用显微针、钩、环等挑取单个细胞或孢子以获得纯培养。

小液滴法：将经过适当稀释后的样品制成小液滴，在显微镜下选取只含一个细胞的液滴来进行纯培养物的分离。

;五、选择培养分离;六、微生物的保藏技术;菌种保藏方法;1、传代培养保藏;2、冷冻保藏;2、冷冻保藏;3、干燥保藏法;沙土管保存;冷冻真空干燥保藏;第二节显微镜和显微技术;几个基本概念：;

?1.普通光学显微镜（复式显微镜）

机械装置:镜座、支架、载物台、调焦螺旋等

光学系统:物镜、目镜、聚光镜等

??

?使用油镜时加镜油的目的:

(1)增加照明亮度

(2)增加显微镜的分辨率

?;光学显微镜;光学理论依据

德国理学家ErnstAbbe，在19世纪70年代建立的在Abbe的公式中，两物体之间的最小可分辨距离被称为最小距离（d）

最小距离=0.5?/nsin?=0.5?/NA

;;公式解析：

λ：所用光源的光波波长，是影响分辨率的最主要因素。

θ:为物镜镜口角的半数，它取决于物镜