结冷胶发酵条件的优化.pptVIP

结冷胶发酵条件的优化第1页，共24页，星期日，2025年，2月5日框架研究背景课题方向124第2页，共24页，星期日，2025年，2月5日研究背景结冷胶是近年来所发现的最有发展前景的微生物多糖之一，过去曾称杂多糖PS-60，1987年，由美国科学家KanekoandKang在默克公司Kelco分公司实验室发现了结冷胶，后来该公司利用稍动鞘脂假单胞菌为生产菌，将其正式投入生产。结冷胶是一种高分子阴离子型多糖，主链是线性四糖重复单位，包括β-D-葡萄糖，β-D-葡萄糖醛酸，α-(1-4)-L-鼠李糖，其组成比例大约为2:1:1，分子量高达500KD，有一些基团被乙酰基和L-甘油酸酯（或盐）取代。第3页，共24页，星期日，2025年，2月5日研究背景结冷胶以两种形式存在，天然结冷胶和低酰基结冷胶第4页，共24页，星期日，2025年，2月5日研究背景结冷胶生物合成的可能途径图中PGI：磷酸葡萄糖异构酶，PGM：磷酸葡萄糖变位酶，UGP：UDP-葡萄糖焦磷酸化酶，TGP：TDP-葡萄糖焦磷酸化酶，UGD：UDP-葡萄糖脱氢酶，TRS：TDP-鼠李糖合成酶第5页，共24页，星期日，2025年，2月5日研究背景结冷胶的特性1.极好的稳定性。结冷胶形成的凝胶具有极好的热稳定性，而且还能耐酸碱。结冷胶可以替代琼脂作为微生物培养基的胶凝剂。2.独特的澄清透明性3.良好的配伍性第6页，共24页，星期日，2025年，2月5日结冷胶应用1面制品中的应用.可以改善面条的口感，还可以提高它们的粘度，弹性以及硬度2乳制品中的应用.具有极其良好的增稠性和凝胶性3代替琼脂。对于对培养基澄清度要求非常高的嗜温微生物而言，高纯度结冷胶代替琼脂，可以解决这个问题。第7页，共24页，星期日，2025年，2月5日课题方向1.从实验保藏的菌种出发，通过紫外线（UV）诱变和亚硝基胍（NTG）诱变，筛选得到高产结冷胶的菌株；2.通过单因素实验和响应面实验对菌株发酵产结冷胶的培养基成分和最适培养条件进行优化，确定了菌株的最佳的发酵条件。并通过10L、1吨发酵罐的实验，进一步摸索菌株的特性，从而使其产量提高；3.研究了离子对结冷胶凝胶温度及凝胶强度的影响，可为后提取提供一定的理论参数。4.对结冷胶的后提取进行了初步的摸索。第8页，共24页，星期日，2025年，2月5日1.结冷胶菌种的诱变本实验室保藏了一株生产结冷胶的菌株Pseudomonaselodea（伊乐假单胞菌），但该菌株产结冷胶的量较低，仅有3.9g/L左右，不适合工业化生产。在研究过程中，以实验室原有菌株为出发菌株进行了紫外线（UV）、亚硝基胍（NTG）诱变处理，经过大量的自然分离，获得了一株转化率较高的菌株P-8，经发酵试验检测，其产胶得率达到14.2g/L，是初始菌株产胶率的3.64倍。第9页，共24页，星期日，2025年，2月5日1.结冷胶菌种的诱变菌株及菌落形态特征第10页，共24页，星期日，2025年，2月5日1.结冷胶菌种的诱变第11页，共24页，星期日，2025年，2月5日1.结冷胶菌种的诱变（小结）以实验室原有菌株为出发菌株，进行了紫外线（UV）、亚硝基胍（NTG）诱变处理，得到一株产胶率高并且性能稳定的菌株P-8，使结冷胶的产胶得率由3.9g/L提高到14.2g/L，提高了2.64倍。并且，该菌株碳源利用较广，能很好的利用有机氮源，最适生长温度为28℃-30℃，最适生长初始pH为6.5～7.0，用磷酸盐缓冲液可保藏半年时间。第12页，共24页，星期日，2025年，2月5日2.结冷胶发酵条件的研究菌株的高产特性不仅由其遗传特性决定，而且也由其所处的环境条件决定。先在摇瓶培养的基础上，确定了较适宜的发酵培养基组成和最佳的培养条件。然后在摇瓶的基础上，在发酵罐中进一步优化伊乐假单胞菌生产结冷胶的条件。从而实现结冷胶高产量和高生产强度的相对统一。第13页，共24页，星期日，2025年，2月5日2.结冷胶发酵条件的研究1种龄及接种量对结冷胶发酵的影响2初始pH对发酵的影响3温度对发酵的影响4培养基装液量及摇床转速对发酵的影响第14页，共24页，星期日，2025年，2月5日2.结冷胶发酵条件的研究1种龄及接种量对结冷胶发酵的影响 种子的活力主要由种子液的种龄决定，菌体生长最旺盛