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桃小食心虫优良金龟子绿僵菌菌株的筛选及应用性研究

摘要

本研究旨在筛选对桃小食心虫具有高效致病力的金龟子绿僵菌优良菌株，并探究其应用价值。通过收集不同来源的金龟子绿僵菌菌株，以桃小食心虫为研究对象，采用生物测定法测定各菌株的致病力，结合菌株的生长特性和环境适应性，筛选出优良菌株。同时，通过田间试验验证优良菌株的实际防治效果，为桃小食心虫的生物防治提供理论依据和实践指导。

一、引言

桃小食心虫是一种严重危害果树的害虫，主要危害苹果、梨、桃等果实，导致果实品质下降、产量减少。目前，化学防治仍是控制桃小食心虫的主要手段，但长期使用化学农药会带来环境污染、害虫抗药性增强等一系列问题。因此，寻找安全、有效的生物防治方法具有重要的现实意义。

金龟子绿僵菌是一种重要的昆虫病原真菌，具有寄主范围广、致病力强、环境友好等特点，在害虫生物防治中具有广阔的应用前景。然而，不同金龟子绿僵菌菌株的致病力存在显著差异，且其应用效果受环境因素影响较大。因此，筛选出对桃小食心虫致病力强、环境适应性好的优良菌株，是提高其生物防治效果的关键。

本研究通过对不同来源的金龟子绿僵菌菌株进行筛选，明确优良菌株的生物学特性和防治效果，为桃小食心虫的生物防治提供优质的菌种资源和科学的应用方法。

二、材料与方法

（一）供试材料

供试菌株：收集来自不同地区的金龟子绿僵菌菌株，共计10株，分别编号为G1-G10。菌株均保存于PDA斜面培养基上，置于4℃冰箱中冷藏备用。

供试虫源：桃小食心虫幼虫采自当地果园，在实验室条件下用人工饲料饲养至3龄幼虫，选取健康、大小一致的幼虫作为供试虫源。

培养基：PDA培养基（马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，蒸馏水1000mL）用于菌株的培养和保存；SDAY培养基（蔗糖40g，蛋白胨10g，酵母粉10g，琼脂20g，蒸馏水1000mL）用于菌株的生长特性测定。

主要仪器设备：超净工作台、恒温培养箱、显微镜、电子天平、离心机等。

（二）试验方法

菌株的活化与培养：将保存的菌株转接至PDA培养基上，置于25℃恒温培养箱中培养7d，进行活化。然后挑取单菌落转接至SDAY培养基上，25℃培养10d，用于后续试验。

孢子悬浮液的制备：用无菌水冲洗培养好的菌株斜面，收集孢子，经4层纱布过滤，去除菌丝体。用血球计数板计数，调整孢子浓度为1×10?个/mL，置于4℃冰箱中备用。

致病力测定：采用浸渍法测定菌株对桃小食心虫幼虫的致病力。将供试幼虫放入孢子悬浮液中浸渍5s，取出后用吸水纸吸干多余液体，置于培养皿中，每皿10头幼虫，加入适量人工饲料，盖上皿盖。以无菌水处理的幼虫作为对照，每个处理重复3次。将培养皿置于25℃、相对湿度70%、光周期12L:12D的培养箱中培养，每天观察并记录幼虫的死亡情况，计算死亡率和校正死亡率。

生长特性测定：将活化后的菌株接种至SDAY培养基平板中央，25℃培养，分别在培养3d、5d、7d、9d、11d时测量菌落直径，计算菌落生长速率。同时，观察菌落形态特征，如颜色、质地、边缘等。

环境适应性测定：

温度适应性：将孢子悬浮液分别置于15℃、20℃、25℃、30℃、35℃的恒温培养箱中培养，24h后测定孢子萌发率。

湿度适应性：将接种有菌株的SDAY培养基平板分别置于相对湿度50%、60%、70%、80%、90%的培养箱中，25℃培养7d，测量菌落直径。

田间防治效果试验：选取桃小食心虫发生严重的果园，设置3个处理：优良菌株孢子悬浮液喷雾处理、化学农药（对照药剂）喷雾处理、清水对照。每个处理3次重复，小区面积为20m2。于桃小食心虫幼虫孵化高峰期进行喷雾处理，施药后10d、20d、30d调查虫果率，计算防治效果。

（三）数据统计与分析

采用SPSS22.0软件对数据进行统计分析，采用单因素方差分析（ANOVA）和Duncan多重比较法检验不同处理间的差异显著性。死亡率和校正死亡率的计算公式如下：

死亡率（%）=（死亡虫数/供试虫数）×100

校正死亡率（%）=（处理组死亡率-对照组死亡率）/（1-对照组死亡率）×100

防治效果（%）=（对照组虫果率-处理组虫果率）/对照组虫果率×100

三、结果与分析

（一）不同菌株对桃小食心虫幼虫的致病力

由表1可知，不同金龟子绿僵菌菌株对桃小食心虫幼虫的致病力存在显著差异。处理7d后，G3菌株的校正死亡率最高，达到86.7%，显著高于其他菌株；其次是G5菌株和G7菌株，校正死亡率分别为73.3%和66.7%；G1菌株的校正死亡率最低，仅为23.3%。

表1不同金龟子绿僵菌菌株对桃小食心虫幼虫的致病力（处理7d