第十二章高效液相改.pptVIP

第1页，共22页，星期日，2025年，2月5日一、HPLC与经典LC区别主要区别：固定相差别，输液设备和检测手段1．经典LC：仅做为一种分离手段柱内径1~3cm，固定相粒径100μm且不均匀常压输送流动相柱效低（H↑，n↓）分析周期长无法在线检测2．HPLC：分离和分析柱内径2~6mm，固定相粒径10μm（球形，匀浆装柱）高压输送流动相柱效高（H↓，n↑）分析时间大大缩短可以在线检测第2页，共22页，星期日，2025年，2月5日二、HPLC与GC差别相同：兼具分离和分析功能，均可以在线检测主要差别：分析对象的差别和流动相的差别1．分析对象GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物的样品不可检测占有机物的20%HPLC：溶解后能制成溶液的样品，不受样品挥发性和热稳定性的限制分子量大、难气化、热稳定性差及高分子和离子型样品均可检测用途广泛，占有机物的80%第3页，共22页，星期日，2025年，2月5日续前2．流动相差别GC：流动相为惰性气体组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用HPLC：流动相为液体流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、改善分离度增加了因素，对分离起很大作用流动相种类较多，选择余地广流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相可以增大分离选择性3．操作条件差别GC：加温操作HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小）第4页，共22页，星期日，2025年，2月5日三、高效液相色谱仪流程图1．贮液罐（滤棒，可滤去颗粒状物质）2．高压泵（输液泵）3．进样装置4．色谱柱——分离5．检测器——分析6．废液出口或组分收集器7．记录装置第5页，共22页，星期日，2025年，2月5日续前四、HPLC的特点和应用“三高”“一快”“一广”高柱效——n=104/米，柱效高（远高于一般LC）高灵敏度高选择性分析速度快应用范围广泛（可分析80%有机化合物）第6页，共22页，星期日，2025年，2月5日第二节基本理论和条件选择热力学理论：塔板理论——平衡理论基础动力学理论：速率理论——Vander方程一、塔板理论二、速率理论三、HPLC法中分离条件的选择第7页，共22页，星期日，2025年，2月5日一、塔板理论第8页，共22页，星期日，2025年，2月5日二、速率理论（与GC对比）1.2.第9页，共22页，星期日，2025年，2月5日图示第10页，共22页，星期日，2025年，2月5日三、HPLC法中分离条件的选择1.固定相与装柱方法的选择：选粒径小的、分布均匀的球形固定相（dp≤10μm）首选化学键合相，匀浆法装柱2.流动相及其流速的选择：选粘度小、低流速的流动相——甲醇，1ml/min3.柱温的选择：选室温250C左右第11页，共22页，星期日，2025年，2月5日第三节各类高效液相色谱法一、化学键合相色谱法（BPC）二、液固吸附色谱法（LSC）三、液液分配色谱法（LLC）第12页，共22页，星期日，2025年，2月5日一、化学键合相色谱法（BPC）（一）化学键合相（二）反相键合相色谱（三）正相键合相色谱第13页，共22页，星期日，2025年，2月5日（一）化学键合相利用化学反应将固定液的官能团键合在载体表面1．分离机制：分配+吸附（以LLC为基础）2．特点：1）不易流失2）热稳定性好3）化学性能好4）载样量大5）适于梯度洗脱第14页，共22页，星期日，2025年，2月5日（二）反相键合相色谱1．分离机制：疏溶剂理论正相——流动相与溶质排斥力强，作用时间↑k↑，组分tR↑反相——流动相与溶质排斥力弱，作用时间↓，