第十七章 流式细胞仪分析技术及应用.pptVIP

FS：反映颗粒的大小SS：反映颗粒的内部结构复杂程度FL：反映颗粒被染上的荧光数量多少一、参数第30页，共55页，星期日，2025年，2月5日单参数直方图双参数直方图:点图 二维等高图 假三维等高图三参数直方图多参数分析直分析方图设门分析:REGION和GATE设置二、数据显示方式第31页，共55页，星期日，2025年，2月5日由一维参数(散射光或荧光)与颗粒计数(COUNT)构成，反映同样散射光或荧光强度的颗粒数量的多少。（一）单参数直方图第32页，共55页，星期日，2025年，2月5日单参数直方图细胞相对数量信道(channel)第33页，共55页，星期日，2025年，2月5日1.双参数直方图点图绿色荧光强度红色荧光强度第34页，共55页，星期日，2025年，2月5日双参数直方图点图第35页，共55页，星期日，2025年，2月5日多参数分析：当细胞标记了多色荧光，被激发光激发后，得到的荧光信号和散射光信号可根据需要进行组合分析。（四）流式细胞仪的多参数分析第36页，共55页，星期日，2025年，2月5日Gate设置：指在某一张选定参数的直方图上，根据该图的细胞群分布选定其中想要分析的特定细胞群，并要求该样本所有其他参数组合的直方图只体现这群细胞的分布情况。根据门的形状又分为了线性门、矩形门、圆形门、多边形门、任意形状门和十字门。三、设门分析技术第37页，共55页，星期日，2025年，2月5日A淋巴细胞B单核细胞C中性粒细胞A、B、C均为任意门第38页，共55页，星期日，2025年，2月5日线性门第39页，共55页，星期日，2025年，2月5日第1页，共55页，星期日，2025年，2月5日流式细胞术(flowcytometry,FCM)是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的新技术。第2页，共55页，星期日，2025年，2月5日第3页，共55页，星期日，2025年，2月5日细胞组成细胞功能大小细胞表面/胞浆/核--特异性抗原粒度细胞活性DNA,RNA含量胞内细胞因子蛋白质含量激素结合位点钙离子,PH值,膜电位酶活性流式细胞仪常检测的细胞特性第4页，共55页，星期日，2025年，2月5日采用激光作为激发光源，利用荧光染料与单克隆抗体技术结合的标记技术用计算机系统对流动的单细胞悬液中单个细胞的多个参数信号进行数据处理分析，一、工作原理第5页，共55页，星期日，2025年，2月5日（1）液流系统（2）光学系统（3）数据处理系统1.流式细胞仪的基本结构：第6页，共55页，星期日，2025年，2月5日由样本和鞘液组成待测细胞 单个细胞的悬液 荧光染料标记的单抗对其染色受清洁气体压力 从样品管进入流动室形成样本流（1）液流系统第7页，共55页，星期日，2025年，2月5日鞘液：辅助样本流被正常检测的基质液。主要作用是包裹样本流的周围，保持样本流中细胞处于喷嘴中心位置，防止其靠近孔壁而阻塞喷孔。 第8页，共55页，星期日，2025年，2月5日喷嘴FluorescencesignalsFocusedlaserbeam鞘液液流系统示意图第9页，共55页，星期日，2025年，2月5日FCM的液流系统（如何形成单个细胞流）样本管鞘液管第10页，共55页，星期日，2025年，2月5日激光光源：气冷式氩离子激光器分色反光镜：反射长/短波长，通过短/长波长光束成形器：两十字交叉放置的透镜透镜组：形成平行光，除去室内光滤片：长通、短通、带通光电倍增管：FS,SS（散射光），FL1,FL2,FL3,FL4（荧光）（2）光学系统第11页，共55页，星期日，2025年，2月5日FlowTipLaserSSandFLDetectorFSDetector光学系统示意图第12页，共55页，星期日，2025年，2月5日主要由计算机及其软件组成（3）数据处理系统第13页，共55页，星期日，2025年，2月5日基本工作原理第14页，共55页，星期日，2025年，2月5日单细胞液柱已标记的单细胞悬液和鞘液硅化管流动室喷嘴荧光检测系统和散射光感受系统收集光信号荧光染料被激发发光光电倍增管脉冲信号计算机系统分析结果放大垂直相交形成稳态水平激光与之基本过程第15页，共55页，星期日，2025年，2月5日区别流式细