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基于喹啉、萘酰亚胺的双光子黏度荧光探针的设计、合成与性能探究

一、引言

1.1研究背景与意义

荧光探针作为一种重要的分析工具，在过去几十年间取得了飞速发展。它利用荧光信号的变化来实现对目标物质或环境参数的高灵敏度、高选择性检测，已被广泛应用于化学、生物、医学、环境科学等多个领域。从最初简单的荧光染料用于生物样品的染色，到如今针对各种特定生物分子、离子以及细胞微环境参数（如pH、温度、粘度等）设计的智能型荧光探针，荧光探针的发展极大地推动了相关学科的进步。

双光子荧光探针作为荧光探针领域的重要分支，近年来在生物成像领域展现出独特的优势和巨大的潜力。传统的单光子荧光成像技术在对生物组织进行成像时，由于激发光波长较短，在组织中容易发生散射和吸收，导致成像深度受限，且对生物样品造成较大的光损伤。而双光子荧光成像技术基于双光子吸收原理，采用长波长的近红外光作为激发光源，有效克服了单光子成像的诸多不足。近红外光在生物组织中的散射和吸收较小，能够实现对深层组织的高分辨率成像，同时减少了对生物样品的光损伤，使得长时间、实时观察生物体内的生理和病理过程成为可能。这对于深入理解生物体内的复杂机制，如神经信号传导、细胞间通讯、肿瘤发生发展等过程，具有重要的意义。

喹啉和萘酰亚胺类化合物因其独特的结构和优异的光学性质，成为构建荧光探针的理想选择。喹啉具有良好的电子共轭结构和刚性平面，能够有效地传递和转移电子，其衍生物在荧光探针领域表现出对多种离子和生物分子的高选择性识别能力。萘酰亚胺则具有较高的荧光量子产率、良好的光稳定性和较大的Stokes位移，使其在荧光传感和成像应用中备受关注。将喹啉和萘酰亚胺的结构优势相结合，设计合成基于两者的双光子黏度荧光探针，有望综合利用它们的光学特性，实现对生物体系中黏度变化的高灵敏度、高选择性检测。生物体系中的黏度作为一个重要的物理参数，与细胞的生理功能、代谢活动以及许多疾病的发生发展密切相关。例如，在肿瘤细胞中，由于细胞内代谢活动的异常增强和细胞骨架结构的改变，细胞内黏度往往会发生显著变化。通过对细胞内黏度的检测，可以为肿瘤的早期诊断、治疗效果评估以及发病机制研究提供重要的信息。此外，在神经系统中，神经递质的释放、神经元的活动等过程也与局部微环境的黏度密切相关。因此，开发能够精确检测生物体系中黏度变化的荧光探针，对于深入研究生物过程、揭示疾病机制以及开发新型诊断和治疗方法具有重要的价值。

1.2双光子荧光显微技术

1.2.1双光子吸收与双光子荧光

双光子吸收是一种非线性光学过程，其原理基于量子力学中的能级跃迁理论。在传统的单光子吸收过程中，分子吸收一个光子的能量，从基态跃迁到激发态，光子能量需满足分子基态与激发态之间的能级差，即E=h\nu，其中E为能级差，h为普朗克常数，\nu为光子频率。而在双光子吸收过程中，在高光子密度的条件下，分子能够同时吸收两个光子，这两个光子的能量之和等于分子基态与激发态之间的能级差，即E=h\nu_1+h\nu_2，其中\nu_1和\nu_2分别为两个光子的频率。由于双光子吸收过程涉及两个光子的同时作用，其发生的概率与激发光强的平方成正比，这就要求激发光源具有极高的瞬时功率，通常采用超短脉冲激光（如飞秒激光）来实现。

当荧光分子发生双光子吸收后，被激发至激发态。处于激发态的分子是不稳定的，会通过各种弛豫过程回到基态。在这个过程中，分子以辐射跃迁的方式释放能量，发射出一个荧光光子，这就是双光子荧光的产生机制。与单光子荧光相比，双光子荧光的发射波长通常略小于激发光波长的一半，这是因为双光子吸收过程中分子吸收的总能量相当于一个波长更短的单光子的能量。例如，若使用波长为800nm的近红外光作为双光子激发光源，荧光分子发射的双光子荧光波长可能在400-450nm左右，具体波长取决于荧光分子的结构和能级特性。双光子吸收过程中，基态与激发态之间存在一个虚拟中间态。分子首先吸收第一个光子跃迁到虚拟中间态，该虚拟中间态的寿命极短，仅能存在几飞秒。在这极短的时间内，分子若能吸收第二个光子，则会从虚拟中间态跃迁到激发态，然后通过辐射跃迁发射荧光光子回到基态。这种独特的激发过程使得双光子荧光具有一些特殊的性质，如激发光波长较长，在介质中的穿透性较好；荧光发射具有较强的空间局域性，仅在激发光焦点附近产生荧光等。

1.2.2双光子荧光显微技术及其优势

双光子荧光显微技术的成像原理基于双光子吸收和荧光发射过程。实验装置主要由飞秒脉冲激光器、扫描系统、显微镜光学系统和探测器组成。飞秒脉冲激光器发出高功率、超短脉冲的近红外激光，经过扫描系统（如振镜或声光偏转器）控制激光的扫描路径，使激光聚焦到样品上的不同位置。当聚焦的激光作用于样品中的荧光分子时，在焦点处产生双光子吸收，荧光