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长期施肥对水稻土固氮基因（nifH）的影响：组成变化与表达调控机制探究

一、引言

1.1研究背景

水稻作为全球最重要的粮食作物之一，为世界上半数以上人口提供主食。在我国，水稻种植历史悠久，种植区域广泛，从南方的热带、亚热带地区到北方的温带地区均有分布。近年来，我国水稻种植面积基本稳定在3000万公顷左右，产量持续增长，为保障国家粮食安全发挥着关键作用。

在水稻种植过程中，氮肥的投入对于提高水稻产量起着重要作用。氮是植物生长所必需的大量元素之一，它参与植物蛋白质、核酸、叶绿素等重要物质的合成，直接影响植物的生长发育和产量形成。然而，目前我国氮肥的使用存在诸多问题。一方面，氮肥施用量过高。据统计，我国每年农用氮肥施用折纯量虽在政策影响下有所下降，但仍处于较高水平，如2022年为1654.18万吨。过量施用氮肥不仅增加了生产成本，还带来了一系列环境问题，如土壤酸化、水体富营养化、温室气体排放增加等。另一方面，我国氮肥利用率相对偏低，仅在41.3%左右，远低于发达国家50%-60%的水平。这意味着大量的氮肥未被水稻有效利用，造成了资源的浪费。

为了解决氮肥使用中存在的问题，提高氮肥利用效率，生物固氮成为研究的热点。生物固氮是指固氮微生物利用其独特的固氮酶系统，将大气中的氮气转化为植物可以利用的氨或铵盐的过程。与工业固氮相比，生物固氮具有高效、节能、环保等优点，能够在常温常压下进行，是一种生态友好型固氮方法。生物固氮对于解决土壤氮素缺乏问题、节约化肥开支，以及减少使用化肥带来的生态问题具有重要意义。

在生物固氮过程中，固氮酶起着关键作用，而nifH基因是编码固氮酶铁蛋白的关键基因，是固氮微生物所特有的，其存在与否以及表达水平直接关系到生物固氮的能力。nifH基因具有较高的保守性，同时在不同固氮微生物种群和菌株间也存在一定的多样性，这种多样性使得不同的固氮微生物在不同的环境条件下发挥固氮作用。因此，研究nifH基因的组成和表达情况，对于深入了解生物固氮机制、挖掘高效固氮微生物资源具有重要意义。

长期施肥作为农业生产中的一项重要管理措施，对土壤微生物群落结构和功能有着深远的影响。不同的施肥方式，如施用化肥、有机肥、秸秆还田等，会改变土壤的理化性质，如土壤pH、有机质含量、养分含量等，进而影响土壤中固氮微生物的生存环境和群落结构，最终对nifH基因的组成和表达产生作用。例如，有研究表明，长期施用有机肥能够增加土壤中有机质含量，改善土壤结构，为固氮微生物提供更多的碳源和能源，从而促进固氮微生物的生长和繁殖，影响nifH基因的丰度和多样性。然而，目前关于长期施肥对水稻土nifH基因组成和表达影响的研究还相对较少，且不同研究结果存在一定差异，其内在机制尚不完全清楚。

1.2研究目的与意义

本研究旨在深入探究长期施肥对水稻土中固氮基因（nifH）组成和表达的影响，明确不同施肥处理下nifH基因的丰度、多样性以及群落结构的变化规律，揭示长期施肥影响nifH基因组成和表达的内在机制。具体目标包括：通过分子生物学技术，分析不同施肥处理水稻土中nifH基因的丰度和多样性；研究长期施肥对nifH基因群落结构的影响，确定优势固氮微生物类群；探讨施肥方式、土壤理化性质与nifH基因组成和表达之间的关系。

本研究具有重要的理论意义和实践价值。在理论方面，有助于深入理解生物固氮过程在水稻生态系统中的作用机制，丰富土壤微生物生态学的研究内容，为进一步研究土壤氮素循环提供理论依据。在实践方面，研究结果可以为水稻种植中的合理施肥提供科学指导，通过优化施肥方式，促进土壤中有益固氮微生物的生长和固氮作用的发挥，提高氮肥利用效率，减少氮肥施用量，降低农业生产成本和环境风险，实现农业的可持续发展。同时，对于挖掘和利用高效固氮微生物资源，开发新型生物肥料也具有一定的参考价值，有助于推动农业绿色发展，保障国家粮食安全和生态环境安全。

二、长期施肥对水稻土理化性质及固氮微生物的影响

2.1不同施肥模式概述

施肥是农业生产中维持和提高土壤肥力、保证作物产量的关键措施之一。常见的施肥类型主要包括化学肥料、有机肥料以及二者配合的有机-无机配施肥料。化学肥料，如氮肥、磷肥、钾肥等，具有养分含量高、肥效快的特点。以氮肥为例，尿素是一种常见的化学氮肥，含氮量高达46%，能迅速为水稻提供氮素营养，促进水稻茎叶的生长。然而，长期单一施用化肥也存在诸多弊端。一方面，长期大量施用化肥会导致土壤酸化，破坏土壤结构，降低土壤的保水保肥能力。有研究表明，长期施用硫酸铵等生理酸性肥料，会使土壤中的氢离子浓度增加，导致土壤pH值下降。另一方面，化肥的过量使用还会造成土壤中养分失衡，氮、磷、钾等大量元素比例失调，同