植物组织培养上海农林上海市农业学校植物科学技术系26课件.pptxVIP

植物组织培养;项目二组培室设计与管理;任务4组培室管理;【能力目标】

能熟记组培常用器材的清洗要求及其步骤

【情感目标】

具有服务“三农”意识、创新意识、环保意识、安全意识、团队意识

具有任务执行力，规范操作、一丝不苟的工作态度。;一、环境日常管理

1.注重员工培训

组培员工的素质高低直接决定了组培工作的效率与质量。

;培训内容包括职业道德、无菌观念、团队精神、组培知识、操作规范、管理制度等。

;2、加强日常管理

（1）实行岗位责任制，明确岗位职责。

（2）建立组培室管理制度，加强员工的安全卫生教育，严格控制人员出入。;（3）药品、器械等分类存放，严格药品使用登记制度。

（4）设施设备维护与保养专人负责，安全使用，定期检修，发现安全隐患及时排除。

（5）上下工序交接记录填写认真、规范。;（6）定期进行空间消毒灭菌，培养室分区、分类摆放瓶苗，标识清晰，污染的瓶苗及时清除。

（7）要求员工注意个人卫生，规范操作，监督互查，相互配合，协同一致，诚实守信。;3.空间消毒

（1）药液喷雾。植物组织培养中常用75%酒精对接种室、培养室空间及墙壁进行喷雾消毒。

;用一些药剂涂擦、喷雾灭菌物体表面，如台面、桌面、墙面、双手、植物材料表面等。

75%的酒精，0.2-1%的新洁尔灭（苯扎溴铵/溴化苯烷铵）喷洒培养室、接种室或其他实验室，可有效杀死空气中的杂菌，同时可降尘。;（2）药剂熏蒸。可采用冰醋酸加热对实验室空间进行熏蒸消毒。

冰醋酸也可进行加热熏蒸，但效果不如甲醛。

熏蒸时，房间可预先喷湿以加强效果。;（3）射线消毒。常用的射线为紫外线,紫外线可损伤皮肤和角膜，应注意防护。;（4）空气污染检验

①平板检验法。

②斜面检验法。;二、组培常用器械消毒

1.高压灭菌锅的使用

①检查仪器仪表（压力表为0）。

②检查灭菌锅安全水位。若水位不足往外锅加水至安全水位。

;③关闭上排气阀，在内锅内放入待灭菌物品，盖上锅盖，打开放气阀，对角拧紧锅盖螺帽后关闭放气阀。;④接通电源打开开关，设置灭菌温度和灭菌时间分别为121℃,20min。待压???上升至0.05MPa时缓慢打开上排气阀，将冷空气排尽为0时，关闭排气阀。;⑤继续加热待温度上升至121℃、0.1MPa时间维持20min后关闭电源，打开上排气阀，待压力表为0MPa后，打开放气阀，依次打开锅盖，取出物品水平放。;2.真空泵

用以辅助过滤除菌。常用于植物生长调节物质和抗生素。一般利用孔径为0.22μm微孔滤膜来进行除菌。;液体过滤;微孔过滤;空气过滤;3.烘箱

在烘箱内加热烘烤至160～170℃，维持2h可杀灭包括芽胞在内的所有微生物，适用于耐高温的玻璃器皿、瓷器、玻璃注射器、接种器械、工作服等）。;——干热灭菌的物品要预先洗净并妥善包扎，放入箱内，以免灭菌后取用时重新污染。

;——干热灭菌后，待充分冷凉，才能打开烘箱，以免因骤冷而使器皿破裂，防止强烈的冷热对流使冷空气被吸入包扎层内引起污染。;注意：

1、玻璃器皿等在灭菌前必须正确包裹和封口，以保证玻璃器皿灭菌后不被外界杂菌所污染。

2、物品放入干燥烘箱内，不能摆放过密，以免妨碍空气流通，不得使器皿与烘箱内层底板直接接触。;使用对象;金属器械与材料直接接触的部分，需在酒精灯外焰部分灼烧充分，直至尖端部分烧红为止。

高温灭菌器，温度达200-300℃，灭菌时间30秒以上。；冷却后使用。;注意问题;三、组培常用器具洗涤与灭菌;2.清洗方法：

1）新玻璃器皿：用1%左右的稀盐酸将可溶性无机物除去，也可用洗涤剂洗涤。;2）用后玻璃器皿：需立即浸入水中（如有污染，应先用70%的酒精浸泡灭菌），再选择碱洗法/酸洗法洗涤。

;3）有微生物污染的器皿：必须先煮沸或高温高压杀菌，否则会产生孢子飞扬，污染环境。;温热的洗衣粉溶液清洗，再用60-70℃的热水清洗，自来水冲洗干净后，再用蒸馏水漂洗两遍。;当玻璃器皿上粘有蛋白质或其他有机物时，用稀盐酸将玻璃器皿浸泡4h或较长时间（最好过夜），将可溶性的有机物除去，再用水清洗。;洗液的配置;3.玻璃器皿的洗涤

对新购或使用过但未污染的玻璃器皿采用酸洗法或碱洗法进行清洗。

;新购玻璃器皿或使用过未污染的洗涤方法;污染物洗涤前的处理：

曾装有污染组织或培养基的器皿，不打开瓶盖，先把它们放入高压蒸汽灭菌锅中灭菌，减少污染微生物。

或用70%的酒精（稀酸稀碱）滴入覆盖污染物表面几分钟。

丢弃污染的一次性消耗品，应先高压蒸汽灭菌，以降低污染源。;使用过的玻璃器皿有污染的洗涤方法;玻璃器皿的存放;玻璃器皿的存放;

;案例;4.吸管等难洗的用具：可以在洗液中浸泡后再洗。

5.金属用品：用酒精擦干并保持干燥。;6.胶皮塞、胶皮管：用合成洗