植物组织培养上海农林上海市农业学校植物科学技术系55课件.pptxVIP

植物组织培养;项目四无菌操作;【知识目标】

掌握无菌接种技术

【技能目标】

熟练使用超净工作台与接种器具

会进行初代培养;【情感目标】

培养学生无菌意识、创新意识、团队合作意识和生态环保意识

具有任务执行力，规范操作、注意安全

具有科学严谨、实事求是的工作态度;;一、定义;（1）进入缓冲间更换工作服，带上口罩和帽子，换拖鞋，洗手等。;（2）然后进风淋室，对工作人员进行消毒灭菌。（有条件的情况下）;进入接种室打开超净工作台、打开超净工作台的紫外灯，检查仪器表是否正常。;（3）退出接种室后关门，并打开接种室的紫外灯。;（4）脱下工作服、口罩、帽子、拖鞋，退出缓冲间关门并打开缓冲间紫外灯。;（5）等待空间消毒灭菌15-20分钟，期间准备好所有外植体消毒的材料、培养基和接种工具。;（6）待空间消毒灭菌时间满后，检查紫外灯是否关闭。;（7）按照步骤（1）、（2）进入接种室。;（8）调整座位高度，以达到舒适度为宜。;（9）消毒工作台，喷洒酒精于工作台上下左右4面，勿喷出风面。;（10）取出酒精棉同一方向擦拭5个面，包括出风口。;（11）打开酒精灯调整灯芯长度为1.5cm。;（12）将用酒精棉擦拭接种工具，后插入消毒器灭菌（300℃）。

;（13）其他用具材料带入工作台前先需喷洒酒精消毒，分别放置于工作台面。;（14）点燃酒精灯，消毒双手后开始接种操作。;超净工作台面灭菌：70%酒精擦洗，并用紫外灯照射20min。

接种物品的灭菌：接种服、帽子、口罩要常清洗、并用紫外线灭菌。双手须用肥皂水洗干净，进行操作前再用70%酒精擦洗双手。;植物组培接种过程图解;案例分析;（2）取出培养基打开瓶盖，盖口向下放置台面，瓶身与出风面平行，瓶口不能对着出风口或向上，应平行或微向下。;接种时在近火焰处打开瓶口，使瓶倾斜，以免空气中微生物落入瓶中。;整个接种操作应在近火焰处进行，且动作要迅速。;（3）用冷却的接种工具接种材料。材料要均匀分布。;（4）接完一瓶用酒精棉擦拭工具插入消毒器灭菌，待消毒时间已满取出冷却，以便循环使用。（一般准备两套接种工具）;（5）接种完毕，清理工作??面，关闭工作台。同时做好标识。;注意事项：

1）防止交叉污染。左右手不能相互交叉；每切割完1瓶母种材料就更换无菌滤纸；接种工具不能碰到台面；接种工具要全面充分灼烧。;2）在酒精灯火焰的有效范围内操作（直径10cm）。;3）接种人员注意个人卫生，要经常勤剪指甲，穿工作服、戴口罩与帽子，并严格灭菌。;4）酒精棉球擦拭接种工具，将镊子和剪子从头至尾过火，尖端烧红。最后用高温消毒器。;5）每次双手离开超净操作台再次进入时需用酒精消毒双手。取拿物品后需用酒精消毒双手和物品再放入操作台。有包装的物品需酒精消毒后移入操作台后再拆包装。;6）接种完毕，清理工作台。;接种用具如刀、剪、镊子每次使用前需灭菌处理，每用一次，需重新灭菌一次。防止交叉污染。;瓶口要在酒精灯火焰附近打开。如不用酒精灯，需将瓶子倾成斜角操作，并尽量在超净工作台靠近里面位置操作。;手臂勿在培养基、无菌材料、接种器上方经过。;在瓶中将培养材料剪成若干小茎段，然后用镊子夹出来，直接接种到含有新鲜培养基的容器中。;将培养材料用镊子夹出来，放到无菌的培养皿或培养盘中，用剪子剪成若干小茎段或用长柄解剖刀在无菌培养皿中切割成若干小茎段。;种子和分生组织，培养时通常将其贴放在培养基表面，而不是插到培养基内部，以免供氧不足。;接种茎段：注意形态学下端插入培养基内，而形态学上端露于空气中;主要为以下几个方面：

1、外部进行保洁

由于很多超净台都是在非洁净车间使用，外界的灰尘很容易对超净工作台产生影响。一般外部的工作台面用不掉毛的清洁布擦拭即可。;2、工作台面的保洁

由于工作台面的材质为SUS304不锈钢，所以一般最好使用无尘车间的专用抹布进行清洁。尤其注意的是禁止使用容易掉毛的毛巾进行擦拭。在擦拭过程中，也可以使用酒精作为擦拭液体，酒精容易挥发，可很到的起到台面的保洁工作。;3、工作台的初效过滤网

由于初效过滤网一般为G4过滤棉，过滤棉可清洗3-4次左右，勤洗勤换初效过滤器将可有效的保护高效过滤器和风机。;4、风机的保养

由于风机的持续长时间运转，很难避免有一些灰尘会进入到风机内部，还是需要定期对风机的轴承进行加润滑油保养。同时要对风机叶轮和表面的灰尘进行酒精擦拭。;5、高效过滤器的保洁

高效过滤器的滤芯由于其过滤精度较高，且主要材质是玻璃纤维纸材质，是不能清洗的，

只能定期更换。根据使用环境，

一般在非洁净的密闭空间里，

2年左右就需要更换一次。;接种技术定义

接种过程

接种注意事项;重点：接种技术定义

难点：接种技术流程