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银杏内酯B抵御Ox-LDL诱导内皮祖细胞氧化损伤的机制解析

一、引言

1.1研究背景与意义

心血管疾病已成为全球范围内威胁人类健康的主要疾病之一。据统计，心血管病死亡占城乡居民总死亡原因的首位，农村为44.8%，城市为41.9%，其疾病负担日渐加重，成为重大的公共卫生问题。动脉粥样硬化作为心血管疾病的重要病理基础，其发生发展与血管内皮细胞损伤密切相关。

内皮祖细胞（EPCs）是一类能循环、增殖并分化为成熟血管内皮细胞的前体细胞，在血管新生、内皮损伤修复等过程中发挥着关键作用。然而，氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）作为动脉粥样硬化发生发展中的关键致病因素，可诱导内皮祖细胞发生氧化损伤，使其功能受损，数量减少，进而影响血管内皮的修复和血管新生能力，加速动脉粥样硬化的进程。

银杏内酯B是从银杏叶中提取的一种具有多种生物活性的天然产物。已有研究表明，银杏内酯B在心血管系统中具有一定的保护作用，如抗氧化、抗炎、抗血小板聚集等。但银杏内酯B对Ox-LDL诱导的内皮祖细胞氧化损伤是否具有保护作用及其具体机制尚不完全明确。因此，深入研究银杏内酯B对Ox-LDL诱导内皮祖细胞氧化损伤的保护作用及机制，不仅有助于揭示动脉粥样硬化的发病机制，还可能为心血管疾病的防治提供新的靶点和策略，具有重要的理论意义和临床应用价值。

1.2国内外研究现状

在国外，众多学者围绕Ox-LDL诱导内皮祖细胞氧化损伤展开了研究。研究发现Ox-LDL可通过多种途径诱导内皮祖细胞氧化应激，如激活NADPH氧化酶，促使活性氧（ROS）大量产生，破坏细胞内氧化还原平衡。同时，Ox-LDL还能诱导内皮祖细胞凋亡，降低其迁移、黏附和增殖能力，进而影响血管内皮的修复和再生功能。在银杏内酯B对内皮细胞保护作用方面，国外有研究表明银杏内酯B可减轻氧化应激对人脐静脉内皮细胞的损伤，其机制可能与抑制ROS的产生、调节抗氧化酶活性有关。但针对银杏内酯B对Ox-LDL诱导的内皮祖细胞氧化损伤的保护作用研究相对较少。

在国内，相关研究也取得了一定进展。有研究证实了Ox-LDL对内皮祖细胞的毒性作用，会导致细胞内丙二醛（MDA）含量升高，超氧化物歧化酶（SOD）活性降低，提示细胞受到氧化损伤。在银杏内酯B的研究方面，国内学者发现银杏内酯B可改善血管内皮功能，对心血管疾病具有一定的预防和治疗作用。但对于其在保护内皮祖细胞免受Ox-LDL氧化损伤的具体机制研究还不够深入，有待进一步探索。

1.3研究目的与内容

本研究旨在明确银杏内酯B对Ox-LDL诱导的内皮祖细胞氧化损伤是否具有保护作用，并深入探讨其作用机制。具体研究内容如下：

观察银杏内酯B对Ox-LDL诱导的内皮祖细胞活力和凋亡的影响：采用不同浓度的银杏内酯B预处理内皮祖细胞，再给予Ox-LDL刺激，通过CCK-8法检测细胞活力，流式细胞术检测细胞凋亡率，明确银杏内酯B对内皮祖细胞活力和凋亡的影响。

探究银杏内酯B对Ox-LDL诱导的内皮祖细胞氧化应激的调节作用：检测细胞内MDA含量、SOD活性以及ROS水平等氧化应激指标，分析银杏内酯B对Ox-LDL诱导的内皮祖细胞氧化应激的调节作用。

探讨银杏内酯B保护内皮祖细胞氧化损伤的潜在信号通路：通过Westernblot等技术检测相关信号通路蛋白的表达，探究银杏内酯B保护内皮祖细胞氧化损伤的潜在信号通路，为揭示其作用机制提供理论依据。

1.4研究方法与技术路线

实验方法：本研究将采用密度梯度离心法从人外周血中分离单个核细胞，诱导培养为内皮祖细胞。实验分为正常对照组、Ox-LDL损伤组、银杏内酯B不同浓度保护组，分别进行相应处理。采用CCK-8试剂盒检测细胞活力，流式细胞术检测细胞凋亡和ROS水平，生化试剂盒检测MDA含量和SOD活性，Westernblot检测相关信号通路蛋白表达。

文献研究法：广泛查阅国内外关于Ox-LDL诱导内皮祖细胞氧化损伤、银杏内酯B对内皮细胞保护作用及相关机制的文献资料，对研究现状进行综合分析和总结，为实验研究提供理论支持。

数据分析方法：运用统计学软件对实验数据进行分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用t检验，以P0.05为差异具有统计学意义。

技术路线：

人外周血内皮祖细胞的分离、培养与鉴定。

实验分组与干预：分为正常对照组、Ox-LDL损伤组、银杏内酯B不同浓度保护组。

检测指标：CCK-8法检测细胞活力；流式细胞术检测细胞凋亡和ROS水平；生化试剂盒检测MDA含量和SOD活性；Westernblot