化学微生物学微生物转化.pptVIP

第五节新技术在微生物转化的中

应用随着现代生物科学和生物技术的迅速发展，以及一些分析测试技术的应用，微生物转化也得到了进一步的发展。基因工程技术、固定化细胞转化技术、双水相转化技术、超声波技术、有机介质微生物转化以及生物反应器等综合应用于微生物转化反应体系，不仅可使转化的效率成倍增长，而且还有可能使整个反应过程连续、自动化。同时，一些分析测试技术如核磁共振、质谱等已经应用于微生物转化的在线检测。第94页，共151页，星期日，2025年，2月5日一、基因工程技术在微生物转化中的应用随着近年来分子生物学的发展，人们对基因工程的认识也逐步加深，这为微生物转化提供了新的思路。基因工程技术的发展和实用化为此开辟了有效途径。只要生物细胞中存在有催化某一生化反应的酶，即使其量微不足道，应用基因重组技术，通过基因扩增与增强表达，人们就可能建立高效表达特定酶制剂的基因工程菌或基因工程细胞，从而进一步构建成新一代的催化剂——固定化工程菌或固定化工程细胞。第95页，共151页，星期日，2025年，2月5日如，应用DNA重组技术建立了丝氨酸和色氨酸合成酶工程菌，这种工程菌组装的生物反应器可以用甘氨酸和甲醛为原料制造丝氨酸，反应液含丝氨酸超过400g／L，再从丝氨酸与吲哚转化生成色氨酸，反应液中色氨酸浓度达到200g／L。此外．利用基因工程还可以将能进行生物转化的相关酶从微生物、植物甚至动物细胞中克隆出来．再导入一个微生物中进行表达，从而产生能对底物进行转化的一系列酶，将原来复杂的几种转化过程缩短为一个转化反应。目前在这方面的研究也是微生物转化的一个趋势，并且具有广阔前景。第96页，共151页，星期日，2025年，2月5日二、固定化细胞转化技术在微生物转化中的应用固定化细胞转化技术自20世纪70年代问世以来．已经广泛应用于工业、农业、医学、环境保护、能源开发以及理论研究等方面，并取得了丰硕成果。利用固定化细胞转化技术，省去了破碎细胞提取胞内酶的过程，完整细胞得到固定后，酶活损失较少，活性回收率高，并且保持了细胞内原有的多酶体系，对于一些需要多步催化的反应过程，一步即可完成。被固定的微生物细胞可以是处于生长状态或体眠状态的活细胞也可以是死亡的细胞(但胞内酶的活力仍存在)第97页，共151页，星期日，2025年，2月5日在微生物转化过程研究最多的是固定化活细胞包埋技术。常用的包埋材料有聚丙烯酰胺(PAA)、聚氨基甲酸乙酯(PU)、海藻酸盐凝胶、二氧基硅氧烷、葡聚糖凝胶、聚乙烯醇(PVA)等。以海藻酸钙凝胶为例，其制备过程如下：在室温条件下，将一定浓度的海藻酸钠溶液与微生物细胞混合均匀后，滴加到氧化钙溶液中，形成球珠。第98页，共151页，星期日，2025年，2月5日Kaul等采用了海藻酸盐固定化生物催化剂(简单节杆菌)和底物(氧化可的松)进行碳一位和二位脱氢反应研究。每个凝胶珠都可以看成是一个小的生物反应器，由于缩短了扩散距离，转化率明显提高，反应结束后细胞还可以回收并重复使用第99页，共151页，星期日，2025年，2月5日三、双水相转化技术在微生物转化中的应用双水相转化技术早期主要用于生物分子和细胞的分离与纯化。这是由于生物产品如蛋白质和酶往往是胞内产品，需要经细胞破碎后才能提取、纯化，细胞颗粒尺寸的变化给固一液分离带来了困难，另外这些产品的活性和功能对pH值、温度和离子强度等环境特别敏感．为了克服这些缺点．出现了双水相技术。近年来，该技术开始应用于微生物转化过程．为生物催化过程引入了一种全新的反应体系第100页，共151页，星期日，2025年，2月5日双水相技术的核心是成相介质的选择以及介质浓度的控制，它直接影响到底物和产物在两相中的分配。双水相体系基本上可以分为两大娄：高聚物-高聚物体系和高聚物-低分子物质体系。第101页，共151页，星期日，2025年，2月5日高聚物一高聚物体系是较常用的，典型的例子如在水溶液中的聚乙二醇(PEG)和葡聚糖，当它们浓度达到一定时．溶液变浑浊，静止后形成两个液层，上层富集了PEG，下层则是葡聚糖。Flygare等以聚乙二醇、葡聚糖及Brij35组成的双水相体系，利用分支杆菌(Mycobacteriumsp.)进行胆固醇侧链降解制备雄甾-4-烯-3，17-二酮(AD)和雄甾-1，4-二烯-3，17-二酮(ADD)研究，上层聚乙二醇富集了菌体，使得菌体具有较高的转化活力，转化速率可达到1.0mg／(g·h)。第102页，共151页，星期日，2025年，2月5日四、超声波技术在微生物转化中的应用超声波是指频率高于2×104Hz的机械波。与其他声波一样，超声波可以在弹性介质中传