核酸的制备与提取.pptVIP

第一部份、核酸的基本知识；

第二部份、常用核酸制备方法；;第一部份、核酸的基本知识;1868年瑞士科学家米歇尔(F.Miescher)发現细胞核內含高量磷的酸性物质，命名为核素(后改名为核酸)

早期的研究仅将核酸看成是细胞中的一般化学成分，没有人注意到它在生物体内有什么功能；;核酸作为遗传物质的发現过程;一核酸的概念和重要性

(一)概念

由核苷酸或脱氧核苷酸通过3′，5′-磷酸二酯键连接而成的一类生物大分子，具有非常重要的生物功能，主要是贮存遗传信息和传递遗传信息。包括核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)两类。

(二)重要性

1.与生命活动关系密切，是重要的生命物质。生命的起源、生长、发育、衰老、死亡与之有关。

2.核酸研究是现代生物医学研究的核心。;二、核酸的类别、分布和组成

（一）、类别：

核酸(nucleicacid)分为:脱氧核糖核酸(DNA,deoxyribonucleicacid)与核糖核酸(RNA,ribonucleicacid)。

核糖核酸（RNA）分成以下几类：

1、信使RNA（mRNA）

2、转移RNA（tRNA）

3、核糖体RNA（rRNA）

4、其他的非编码RNA(snRNA,microRNA);（二）、核酸的分布：

1、DNA的分布：

真核生物细胞核，线粒体亦含有DNA.

原核生物集中于核区，核外的质粒

病毒含有DNA或RNA.

2、RNA的分布

存在于细胞质和细胞核中。

发现了许多新的具有特殊功能的RNA：

如反义RNA，核酶等.

病毒和亚病毒RNA有许多种：正链RNA、负链RNA病毒、类病毒、卫星病毒等.

?;（三）核酸的组成;RNA为D-核糖，DNA为D-2-脱氧核糖，二者都是β型。差别：2位羟基是否脱氧。;（2）碱基：

a、嘌呤碱：腺嘌呤（Ade)、鸟嘌呤(Gua)

b、嘧啶碱：胞嘧啶(Cyt)、尿嘧啶(Ura)、胸腺嘧啶(Thy)

;;碱基相连（核苷）;一切生物的遗传物质——核酸;一、核酸的一级结构

（一）核酸中核苷酸的连接方式

DNA、RNA中的脱氧核苷酸、核苷酸是通过3‘，5‘–磷酸二酯键连接的。

表示方法：书写顺序5‘——3’。

核酸的一级结构是指核酸分子中各核苷酸残基以磷酸二酯键连接、沿多核苷酸链排列的顺序。;核苷酸的组成与连接;DNA的

一

级

结

构

图

示;（二）一级结构的表示方法;2、一级结构特点

DNA的相对分子量非常大，能编码的信息量十分巨大。

细菌的基因是连续的,无内含子功能相关基因组成操纵子，有共同的调控序列，较少重复序列。

真核生物的基因是断裂的，有内含子功能相关基因不组成操纵子，调控序列占比重大，有较大重复序列,又分为高度重复、中度重复、单一序列。此外还有回文结构.

越是高等的真核生物其调控序列和重复序列的比例越大。;二、DNA的二级结构

（1）、模型建立的依据：

Chargaff等科学家用纸层析及紫外分光光度技术分析了各种生物的DNA的碱基组成。结果显示：

摩尔数A=T；G=C；A+C=G+T；A+G=C+T;腺嘌呤;双螺旋平面图

ThedoublehelixmaintainsaconstantwidthbecausepurinesalwaysfacepyrimidinesinthecomplementaryA-TandG-Cbasepairs.ThesequenceinthefigureisT-A,C-G,A-T,G-C.;（2）DNA双螺旋的特点：

A、两条反平行多核苷酸链绕中心轴缠绕，右手螺旋；

B、骨架：内侧碱基垂直于纵轴；

外侧-磷酸与戊糖、彼此通过3’、5’磷酸二酯键，糖环平面与纵轴平行。

大沟宽1.2nm，深0.85nm；

小沟宽0.6nm，深0.75nm；

C、直径：2nm，二相邻碱基高度0.34nm，二核苷酸夹角36度，旋转一周10个核苷酸，一周高度3.4nm；;三、DNA的三级、四级结构：

细长的分子以一种高度压缩状态存在于细胞中，双螺旋的进一步扭曲就构成了三级结构。

超螺旋，三级结构中的一种。

DNA压缩总原则：多级螺旋，4级压缩。;基因A;四、RNA分子的结构与功能

（一）、RNA的类别

1信使RNA(messengerRNA,mRNA);

2转移RNA(transferRNA,tRNA);

3核糖体RNA(ribosomalRNA,rRNA);;;（二）、RNA结构的特点;1、mRNA;5‘Cap的功能：;;tRNA有“接头”(adaptor)功能，具备双重特性；

识别氨基酸——其3’末端的腺苷酸可与一氨基酸共价连接

识别密码子——反