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绵羊多胎性状关键microRNA的筛选鉴定与靶基因功能解析

一、引言

1.1研究背景

绵羊作为重要的农业家畜，其繁殖性能直接关系到养羊业的经济效益。多胎性状是绵羊繁殖的关键特征之一，能够显著提升绵羊的繁殖率，为养羊业带来更多的经济效益。以多胎萨福克羊为例，其母羊能产双羔或三羔，实现年产羔率180%-200%，在新疆伊犁地区，通过引进多胎萨福克羊杂交改良本地哈萨克羊，产羔数增加了37.35%，相同月龄的羔羊屠宰率提高了3%，按100只母羊计算，可多增收68,000元。这充分说明了多胎性状对养羊业发展的重要推动作用。

然而，绵羊多胎性状的遗传机理较为复杂，其遗传力较低，且易受到环境、季节和营养条件等多种因素的影响，使得传统的人工选择进展缓慢。随着分子生物学技术的不断发展，对多胎性状的基因调控机制研究取得了一定进展，发现并证明了一些与多胎有关的基因和QTL。

在基因表达调控中，microRNA（miRNA）逐渐成为研究热点。miRNA是一类由内源基因编码的长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子，在动植物中参与转录后基因表达调控。2024年诺贝尔生理学或医学奖授予了发现微小RNA及其在转录后基因调控中作用的两位美国科学家维克托?安布罗斯和加里?鲁夫昆，这充分肯定了miRNA在基因调控领域的重要地位。人类基因组已编码超过1000个microRNA，它们对生物体的发育和功能具有根本性的重要作用。

在绵羊繁殖领域，研究绵羊多胎性状相关的microRNA具有重要意义。通过筛选差异表达的microRNA并分析其靶基因和功能，有望为揭示绵羊多胎性状的遗传机理提供新的思路和理论依据，从而推动养羊业的可持续发展。

1.2研究目的与意义

本研究旨在通过高通量测序技术筛选绵羊多胎和对照组中的差异表达microRNA，利用生物信息学分析工具预测其靶基因，并进行KEGG和GO富集分析，挖掘潜在的分子通路和功能。同时，筛选出与绵羊多胎性状相关的基因进行验证，探究差异表达microRNA对多胎性状的影响机制，分析其生物学功能和调控机制。

这一研究对于揭示绵羊多胎性状的遗传机制具有重要的理论意义。目前，虽然已经发现了一些与绵羊多胎性状相关的基因，但对于其调控网络的了解仍十分有限。通过对差异表达microRNA及其靶基因的研究，可以深入揭示绵羊多胎性状的遗传调控网络，丰富对绵羊繁殖生物学的认识。

在实际应用中，研究成果可为绵羊的分子育种提供重要的理论依据和技术支持。通过筛选与绵羊多胎性状相关的分子标记，有望实现对绵羊多胎性状的精准选育，提高绵羊的繁殖性能，从而提高养羊业的经济效益，促进养羊业的可持续发展。

1.3国内外研究现状

在绵羊多胎性状研究方面，国内外学者已取得了一系列重要成果。国外早在1919年就选出了第一只高繁殖力Booroola母羊，此后对多胎性状的遗传机制展开了广泛研究。发现了FecB基因，其位点被定位在绵羊第6号染色体上，是常染色体上的单个主基因、显性基因，在Booroola美利奴羊群中存在3种基因型，不同基因型的母羊排卵数和产羔数存在显著差异。

国内对绵羊多胎性状的研究也较为深入，在湖羊和小尾寒羊等品种中检测到了FecB基因。还对生殖激素相关基因（如促性腺激素释放激素1、促性腺激素释放激素受体等）及其他多胎候选基因（如抑制素α亚基、亲吻素等）进行了研究，分析了这些基因的功能、定位以及等位基因、突变体与多胎性状的关联。

在绵羊多胎性状相关microRNA的研究方面，虽然取得了一定进展，但仍存在不足。目前已筛选出一些与绵羊发情过程紧密相关的miRNA，发现它们主要参与卵泡发育、排卵过程的调控等关键生物学过程。然而，对于绵羊多胎性状相关的miRNA研究还不够全面和深入，筛选出的miRNA可能并不全面，对其作用机制的研究也有待加强。在研究过程中，由于样本数量和研究资源的限制，可能影响研究结果的准确性和普遍性。因此，进一步深入开展绵羊多胎性状差异表达microRNA的筛选与靶基因验证研究具有重要的必要性。

二、材料与方法

2.1实验材料

2.1.1实验动物

选取健康、体况良好的多胎小尾寒羊和单胎萨福克羊各10只，均为3-5岁经产母羊。小尾寒羊购自山东某种羊场，萨福克羊购自新疆某种羊场。所有实验羊只在相同的饲养环境下进行饲养管理，采用全舍饲养殖模式，自由采食和饮水，每天定时投喂苜蓿干草和精饲料，保证充足的营养供应。饲养环境保持清洁、干燥，定期进行消毒和防疫工作，以确保羊只的健康状况不受其他因素干扰。

2.1.2主要试剂与仪器

实验所需的主要试剂包括TRIzol试剂（Invitrogen公司），用于总R