第五章 非切片法的制作.ppt

第五节滴片法以滴片法制作鱼类或贝类等的染色体标本。细胞分裂前期细胞分裂中期细胞分裂后期第五章第29页，共45页，星期日，2025年，2月5日第五节滴片法第五章PHA刺激48~72小时原理：

???外周血小淋巴细胞，通常都处在G1期（或G0期），一般情况下不进行分裂。如在培养液中加入植物血凝素（PHA），小淋巴细胞受到刺激可转化为淋巴母细胞，进入有丝分裂。短期培养后，经秋水仙素处理，低渗和固定，即可得到大量的有丝分裂细胞。第30页，共45页，星期日，2025年，2月5日注射PHA（植物细胞凝集素）或酵母液注射秋水仙素低渗固定滴片第五节滴片法第五章染色体制片材料的选择：分裂程度高细胞易于分散含较少的间质和其它嗜碱性物质染色体标本制备程序：第31页，共45页，星期日，2025年，2月5日一、鱼类染色体标本的制备第五节滴片法第五章胚胎(卵裂期或原肠期)，上皮细胞，鳃细胞，肾（头肾)细胞1、材料选择：注射部位杀死鱼前8~10h或16~18h,PHA(8~10μg/g鱼体重)或酵母液(0.2~0.5ml/100g鱼体重)杀死鱼前4~5h，秋水仙素(3~5μg/g鱼体重)第32页，共45页，星期日，2025年，2月5日取头肾,制备细胞悬液0.075mol/LKCl，低渗加固定液静置20~30min，重复2-3次冷滴片Giemsa染色第五节滴片法第五章第33页，共45页，星期日，2025年，2月5日第34页，共45页，星期日，2025年，2月5日外周血短期培养法细胞培养法头肾-PHA注射-淋巴细胞富集法头肾-PHA注射法小鱼游泳法组织浸泡法花鲈染色体第35页，共45页，星期日，2025年，2月5日第五节滴片法第五章二、贝类染色体的制作材料选择：卵胚、幼体（囊胚期~担轮幼虫期）、鳃、生殖细胞（4~8细胞期卵胚）4细胞出现后10~25min，每隔5min处理1批（0.03~0.04%秋水仙素，30min）低渗：25%海水，35℃，30min固定：1：1醋酸甲醇，1：3醋酸甲醇热滴片染色第36页，共45页，星期日，2025年，2月5日第1页，共45页，星期日，2025年，2月5日染色：甲基绿、碘液、1%美兰第一节整体制片法二、半永久和永久性制片一、临时制片第五章1.甘油封片法5%甘油标本蒸发2-3天载片第2页，共45页，星期日，2025年，2月5日怕压、易碎标本：2.甘油胶封片法避免蒸发或流动：最适合于柔软易碎材料。材料固定、水洗5%甘油2h10%甘油1h甘油胶封片石蜡或漆封边玻璃丝（直径0.2-0.5mm）第一节整体制片法第五章第3页，共45页，星期日，2025年，2月5日3.甘油或甘油胶-树胶双封片法材料要观察的面朝向大盖片盖玻片载玻片盖玻片的小片朝下封于载片上第五章第一节整体制片法甘油或甘油胶封片中性树胶封片第4页，共45页，星期日，2025年，2月5日4.聚乙烯醇封片法吸虫新鲜和固定的标本小而透明的标本用木素粉红或酸性品红染色乳酸和石炭酸等量混合剂配4%、5%、10%甲壳动物、单殖吸虫、寄生线虫、棘头虫及动物中粘孢子单殖吸虫猪带绦虫棘头虫第五章第一节整体制片法第5页，共45页，星期日，2025年，2月5日30%Alc→40%Alc→50%Alc→60%Alc→70%Alc→80%Alc→95%Alc→100%Alc→100%Alc→纯酒精/二甲苯2：1→1：1→1：2→纯二甲苯（1）原生动物(或小型浮游生物)整体封片法材料特点：在液体培养基中培养或制备成的悬液弃培养液各级酒精脱水、二甲苯透明封片固定液离心离心中性树胶弃上清液第一节整体制片法第五章5.树胶封片法离心机的转速第6页，共45页，星期日，2025年，2月5日纽虫肝片吸虫肝片吸虫华枝睾吸虫材料特点：身体扁平如叶片状，固定时易卷缩用薄荷冰/水合氯醛于7%生理盐水麻醉(2)吸虫整体封片第五章第一节整体制片法第7页，共45页，星期日，2025年，2月5日70%Alc虫体70%Alc固定2~12h硼砂洋红液染虫体3~10h70%A