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第三章细胞化学染色技术

第一节概述

三、细胞化学染色技术细胞化学染色是以细胞形态学为基础，结合运用化学反应的原理对血细胞内的各种化学成分(如酶类、酯类、铁、蛋白质、核酸等)作定性、定位、半定量分析的方法。

三、细胞化学染色技术基本步骤固定显示复染

三、细胞化学染色技术物理法化学法干燥固定火焰固定蒸汽固定液体固定固定方法

三、细胞化学染色技术偶氮偶联法雪夫反应联苯胺法普鲁士蓝反应金属沉淀法显示方法

三、细胞化学染色技术复染的目的在于使各种细胞能显示出来以便于观察。选择复染液的颜色应与有色沉淀的颜色有明显的对比度，即能使细胞结构显示又能清楚地看出细胞化学染色结果。

三、细胞化学染色技术临床应用辅助判断急性白血病的细胞类型辅助血液系统等疾病的诊断和鉴别诊断观察疾病疗效和预后探讨发病机制

第二节细胞化学染色技术

三、细胞化学染色技术铁染色酸性磷酸酶染色过氧化物酶染色苏丹黑B染色中性粒细胞碱性磷酸酶染色过碘酸-雪夫反应细胞化学染色酯酶染色

三、细胞化学染色技术（一）、铁染色1.原理正常人骨髓中的贮存铁以铁蛋白和含铁血黄素的形式贮存，主要存在于骨髓小粒和幼红细胞中。骨髓中的铁在酸性环境下与亚铁氰化钾作用，形成普鲁士蓝色的亚铁氰化铁沉淀，定位于含铁的部位。

三、细胞化学染色技术一、铁染色（二）正常血细胞的染色反应骨髓中的贮存铁分为细胞外铁和细胞内铁。细胞外铁主要存在于骨髓小粒中；细胞内铁是指存在于中幼红细胞、晚幼红细胞及红细胞中的铁（铁粒幼红细胞、铁粒红细胞）。

三、细胞化学染色技术一、铁染色（二）正常血细胞的染色反应1.细胞外铁观察骨髓小粒中的铁，阳性结果呈弥散性、颗粒状、小珠状或块状蓝色。根据骨髓小粒中铁的存在方式及量，将细胞外铁分为（-）、（+）、（++）、（+++）、（++++）。

三、细胞化学染色技术一、铁染色（二）正常血细胞的染色反应骨髓细胞外铁染色A图：细胞外铁+；B图：细胞外铁++

三、细胞化学染色技术骨髓细胞外铁染色C图：细胞外铁+++；D图：细胞外铁++++一、铁染色（二）正常血细胞的染色反应

三、细胞化学染色技术一、铁染色（二）正常血细胞的染色反应2.细胞内铁观察100个中幼红细胞和晚幼红细胞，计算出铁粒幼红细胞的百分比。铁粒幼红细胞：指胞质中出现蓝色铁颗粒的幼红细胞,根据蓝色铁颗粒的多少及粗细，分为：Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型及环形铁粒幼红细胞。

三、细胞化学染色技术一、铁染色（二）正常血细胞的染色反应2.细胞内铁观察100个中幼红细胞和晚幼红细胞，计算出铁粒幼红细胞的百分比。环形铁粒幼红细胞：指幼红细胞胞质内含铁粒6颗以上，并环绕细胞核排列超过核周径2/3以上者。铁粒红细胞：指成熟红细胞中出现铁颗粒。

三、细胞化学染色技术一、铁染色（二）正常血细胞的染色反应骨髓细胞内铁染色1.环形铁粒幼红细胞；2.铁粒幼红细胞

三、细胞化学染色技术一、铁染色（三）参考范围1.细胞外铁（+）～（++）。2.细胞内铁铁粒幼红细胞阳性率在12％～44％。以Ⅰ型为主，少数为Ⅱ型。无环形铁粒幼红细胞及铁粒红细胞。不同的实验室其细胞内铁的参考范围相差较大，所以要建立自己实验室的参考范围。

三、细胞化学染色技术一、铁染色（四）临床意义主要用于缺铁性贫血和环形铁粒幼红细胞增多性贫血的诊断和鉴别诊断。1.缺铁性贫血其细胞外铁明显减少甚至阴性，细胞内铁阳性率减低或为零。经铁剂治疗有效后，其细胞内铁、外铁增多。因此铁染色可作为诊断缺铁性贫血及指导铁剂治疗的重要方法。

三、细胞化学染色技术临床案例女，40岁，近2年来时常活动后心悸，伴面色苍白神疲乏力，头晕，眼花，食欲减退，腹泻等症状。为明确诊断，前来就诊。既往有月经过多史。查体：神志清，精神尚可，营养适中，形体偏瘦，皮肤黏膜苍白、皮肤干枯，毛发干燥脱落。肝脾肋下未触及，周身皮肤无出血点，生理反射未见异常。实验室检查：WBC:4.2x109/L,RBC:3.1x1012/L,PLT:218x109/L,Hb:65g/L,HCT:0.22,MCV:70fl,MCH:21pg,MCHC:295g/L,RET:1.2%。细胞铁染色：外铁（-），内铁阳性率为0.

三、细胞化学染色技术一、铁染色（四）临床意义2.铁粒幼细胞贫血铁粒幼红细胞增多，其中的环形铁粒幼红细胞增多，有时可见到铁粒红细胞，细胞外铁也明显增多。因此铁染色可作为诊断本病的重要方法。

三、细胞化学染色技术二、过氧化物酶（