绪论代谢工程概述.pptVIP

代谢工程的研究手段1.采用遗传学手段的遗传操作（1）基因工程技术的应用（2）常规诱变技术的应用2.生物合成途径的代谢调控（1）生物合成中间产物的定量生物测定（2）共合成法在生物合成中的应用（3）酶的诱导合成和分解代谢产物阻遏（4）无机磷对生物合成的调节3.研究生物合成机制的常用方法（1）刺激实验法（2）同位素示踪法（3）洗涤菌丝悬浮法（4）无细胞抽提法（5）遗传特性诱变法第26页，共39页。代谢工程的研究方法1分子生物学方法：构建特殊的基因转移系统，尤其对于具有较高生产价值的微生物，具有重要意义。例如Backman等利用切割载体获得Tyr营养突变型，为构建苯丙氨酸的生产菌株奠定基础。2分析化学及检测方法：代谢工程的研究对象是代谢途径，因此必须对代谢通路中的一些酶及产物进行研究和分析。传统的分析通路阻断的手段有：物质平衡、同位素标记、分析障碍突变体等，目前它们仍然是必不可少的手段，而核磁共振、流氏细胞术的应用则为这一领域的发展增添了新的活力。3数学及计算机工具：研究代谢工程不仅需要遗传学知识，而且需要对宿主菌的生化代谢途径和生理学有深入的理解，所以将DNA数据库的信息应用于代谢工程并开发出适合的软件系统是十分必要的，Karp等构建了981个生命体化合物数据库，为未来的发展奠定了基础。人们已在实验的基础上结合数学和化学的理论，发展了一些人工智能程序。第27页，共39页。代谢工程的基本过程 1、代谢分析与代谢设计：代谢工程的研究对象是代谢途径，因此必须对代谢网络中的一些酶及产物进行研究和分析。根据代谢流的分析确定代谢设计的合理靶点，设计合适的代谢工程操作手段，对于靶点进行改造，达到改造代谢的目的。第28页，共39页。第1页，共39页。（优选）绪论代谢工程概述第2页，共39页。本章内容§1.1代谢工程的产生和概念的演变§1.2代谢工程的研究内容§1.3代谢工程的应用领域和前景第3页，共39页。第一节代谢工程的产生和概念的演变现代生物技术手段主要包括基因工程(GeneEngineering)、细胞工程(CellEngineering)、发酵工程(FermentationEngineering)、酶工程(EnzymeEngineering)和生化工程(BiochemicalEngineering)，现代生物技术在化工、医药卫生、农林牧渔、轻工食品、能源和环境等领域都将发挥重要作用，可促进传统产业的改造和新型产业的形成，对人类社会产生深远影响。其中发酵工程是生物技术的重要组成部分，是生物技术转化成产品的重要环节。20世纪90年代提出的代谢工程发展迅速，被视为继传统的蛋白质多肽单基因表达（第一代基因工程）、基因定向突变（第二代基因工程）之后的第三代基因工程。第4页，共39页。代谢研究的产生和发展历史微生物发酵已经有几千年的历史。早在2000年以前，人们就开始利用微生物进行白酒、黄酒、清酒的发酵，此时的发酵为天然发酵时代。20世纪40年代，随着抗生素青霉素的发酵生产的大规模进行，开始了现代发酵工业时代。通过自然选择的方法，人们用10-6的突变几率来筛选所谓的高产菌株。由于没有代谢控制发酵理论作为指导，直到20世纪60年代现代发酵工业仍处于盲目阶段。1957年，日本的木下等人开始了谷氨酸的发酵研究。随着各国对代谢发酵理论的深入研究，许多国家转向发酵菌株本身的研究，获得了许多的氨基酸高产菌株。随后，核酸类物质发酵生产菌也以代谢控制发酵理论为指导进行选育，并奋起直追成为后起之秀。第5页，共39页。早期的代谢研究主要内容*早期研究中侧重应用过程中采用的方法及所达到的目标，通常是对细胞特定的代谢途径进行改造。**代谢控制发酵就是利用遗传学的方法或生物化学方法，人为地在DNA分子水平上改变和控制微生物的代谢，使目的产物大量的生成、积累的发酵。代谢控制发酵的核心为：解除微生物代谢控制机制，打破微生物正常的代谢调节，人为地控制微生物的代谢。第6页，共39页。随着代谢控制发酵理论的日臻完善，目前已发展出一个重要的研究分支——代谢工程。它是近年来分子生物学、生物化学、化学工程学和计算机科学的发展与交差的产物，从而使生物技术突飞猛进的发展，使有关的研究进入了细胞水平。从细胞的代谢途径出发，运用工程学原理进行代谢调控，使之向产物积累的方向发展，由此创建了一个新兴的领域，即“代谢工程”。第7页，共39页。途径工程Pathwayenginee