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北京农学院学报2025，40（3）：95-100http://

JournalofBeijingUniversityofAgriculturedoi:10.13473/ki.issn.1002-3186.2025.0316

小牛胸腺中双链DNA的提取纯化及反应性分析

杨溪，张哲源，贺书楷²，欧阳浩然，何学兰1，刘绍1*

（1.湖南农业大学食品科学技术学院，长沙410128；2.湖南省产商品质量检验研究院，长沙410007）

摘要：【目的】旨在获取高纯度、高反应性的双链DNA，用于后续诊断试剂盒的开发，并提升牛副产物的综

合利用效率。【方法】以小牛胸腺为试验材料，提出一种双链DNA的提取纯化方法：首先采用酚氯仿抽提法制

备粗双链DNA，随后通过两步层析纯化，获得高纯度、高反应性及高灵敏度的双链DNA。两步层析纯化具体方

法为：采用酶联免疫吸附法（ELISA）对不同离子交换层析介质纯化出的双链DNA进行反应滴度测定，筛选出

最佳离子层析介质一一CM阳离子层析；再将CM阳离子交换级分通过S200分子筛层析进一步纯化。【结果】经

此方法获得的双链DNA与Control完整度一致，其纯度A260/A280为1.878，通过间接ELISA（酶联免疫吸附）

检测，其P/N值为4.23，具有良好特异性，灵敏度与反应性均优于Control。【结论】成功提取、纯化出高纯

度、高完整性，兼具特异性良好、反应性与灵敏度高的双链DNA。

关键词：小牛胸腺；双链DNA；ds-DNA；离子交换；酶联免疫吸附

中图分类号：Q456文章编号：1002-3186（2025）03-0095-06文献标志码：A

Extraction,purification,andreactivityanalysisof

double-strandeddnafromcalfthymus

YANGXi,ZHANGZheyuan,HEShukai?,OUYANGHaoran,HEXuelan,LIUShaol*

(1.CollegeofFoodScienceandTechnology,HunanAgriculturalUniversity,Changsha,410128,China;

2.HunanProvincialInstituteofProductandGoodsQualityInspection,Changsha,410007,China)

Abstract:[ObjectiveJToobtaindouble-strandedDNAwithhighpurityandhighreactivity,whichareusedforthesubsequentde-

velopmentofdiagnostickits.Atthesametime,itcanalsoimprovethecomprehensiveutilizationofbovineby-products.[Meth-

odsJUsingcalfthymusastheexperimentalmaterial,amethodforextractingandpurifyingdouble-strandedDNAisproposed.

Afterthecrudedouble-strandedDNAispreparedbyphenol-chloroformextractionfromthecalfthymus,thedouble-stranded

DNAwithhighpurity,highreactivityandhighsensitivityisobtainedthroughtwo-stepchromatographicpurification.Thespe-

cificmethodofthetwo-stepchromatographypurificationisasfollows:Theenzyme-li