细菌内毒素检查法新乡市食品药品药品检验所讲课文档.pptVIP

当存在干扰时，可通过对供试品进行更大倍数的稀释或有关其他适宜的方法（如过滤、中和、透析或加热处理等）排除干扰。导致干扰的因素：排除干扰的方法：pH值稀释抗凝因子中和螯合剂过滤葡聚糖加热第60页，共85页。2010年版药典细菌内毒素

检查法介绍整体结构1.综述部分检查法的描述试验的准备限值（L）的确定确定最大有效稀释倍数（MVD）2.实验部分凝胶法 光度测定法a鲎试剂灵敏度复核 a标准曲线的可靠性实验b干扰实验 b干扰实验c检查法：限量试验 c检查法半定量试验 第28页，共85页。综述部分1.检查法的描述2.试验的准备3.限值（L）的确定4.确定最大有效稀释倍数（MVD）第29页，共85页。本法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。第30页，共85页。检查法的描述细菌内毒素检查包括两种方法，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法。供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。细菌内毒素标准物质a国家标准品b工作标准品细菌内毒素检查用水a凝胶法细菌内毒素检查用水系指内毒素含量小于0.015EU/ml的灭菌注射用水b光度测定法细菌内毒素检查用水，其内毒素含量应小于0.005EU/ml第31页，共85页。试验的准备试验器械的要求试验所用的器皿需经处理，以去除可能存在的外源性内毒素。常用的方法是在250℃干烤至少30分钟，也可采用其他确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。若使用塑料器械，如微孔板和与微量加样器配套的吸头等，应选用标明无内毒素并且对试验无干扰的器械。试验操作过程应防止微生物的污染。第32页，共85页。试验的准备供试品溶液的制备某些供试品需进行复溶、稀释或在水性溶液中浸提制成供试品溶液。一般要求供试品溶液的pH值在6.0～8.0的范围内。对于过酸、过碱或本身有缓冲能力的供试品，需调节被测溶液（或其稀释液）的pH值，可使用酸、碱溶液或鲎试剂生产厂家推荐的适宜的缓冲液调节pH值。缓冲液必须经过验证不含内毒素和干扰因子。第33页，共85页。限值（L）的确定药品、生物制品的细菌内毒素限值（L）除药典有规定的，一般按以下公式确定：L＝K／ML为供试品的细菌内毒素限值；以EU/ml、EU/mg或EU/U表示；K为规定的给药途径，人用每公斤体重每小时最大可接受的内毒素量；以EU/（kg·h）表示。注射剂，K=5EU/（kg·h），其中放射性药品注射剂，K=2.5EU/（kg·h），鞘内用注射剂，K=0.2EU/（kg·h）；M为人用每公斤体重每小时最大剂量；以ml/（kg·h）、mg/（kg·h）或u/（kg·h）表示，人均体重按60kg计算，注射时间小于1小时，按1小时计算按人用剂量计算限值时，如遇特殊情况，可根据生产和临床用药实际情况做必要调整，但需说明理由。第34页，共85页。计算举例：注射用阿莫西林钠根据国家药典委员会编纂的《临床用药须知》：“肌肉注射或稀释后静脉滴注，一次0.5～1g，一日3～4次：小儿按体重每日50～100mg/kg，分3～4次静脉滴注。”M成人＝1000mg/h÷60kg＝16.67mg/(kg·h)M儿童＝100mg/(kg·h)÷3＝33.3mg/(kg·h)L=K/M=5EU/(kg·h)÷33.3mg/(kg·h)=0.150EU/mg限值（L）的确定第35页，共85页。限值计算时做必要调整的几种情况从严原则联合用药特殊情况等限值（L）的确定第36页，共85页。确定最大有效稀释倍数（MVD）最大有效稀释倍数是指供试品溶液被允许稀释的最大倍数，在不超过此稀释倍数的浓度下进行内毒素限值的检测。MVD＝cL／λL：供试品的内毒素限值c：供试品溶液的浓度λ：在凝胶法中鲎试剂的标示灵敏度(EU/ml)，