原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
微生物检验操作技巧指南
一、微生物检验概述
微生物检验是利用微生物学原理和技术，对样品中的微生物进行检测、计数、鉴定和分析的一类实验方法。广泛应用于食品、药品、环境、临床等领域。本指南旨在提供系统的操作技巧，确保检验结果的准确性和可靠性。
二、微生物检验前的准备
（一）环境与设备准备
1.检验环境需符合洁净要求，保持温度（20-28℃）、湿度（45%-60%）稳定。
2.使用超净工作台或生物安全柜，确保无菌操作。
3.准备高压灭菌锅、培养箱、显微镜、天平、移液器等核心设备。
（二）试剂与培养基准备
1.常用培养基包括营养琼脂（NA）、麦康凯琼脂（MAC）、血琼脂（BA）等。
2.自配培养基需按标准方法灭菌（如高压灭菌121℃，15分钟）。
3.预先准备无菌生理盐水、蛋白胨水等稀释液。
（三）样品处理
1.无菌操作取样，避免二次污染。
2.食品类样品需用无菌剪刀剪取内部组织。
3.临床样品需用无菌棉签擦拭或吸取。
三、微生物检验基本操作
（一）平板计数法（MPN法）
1.将样品稀释系列（10?1至10??）。
2.取0.1mL稀释液接种于3个平板，倾注培养基。
3.37℃培养48-72小时，计数菌落数。
4.通过MPN表计算样品中微生物总数（例如：3个平板菌落数分别为30、15、5，则估计值为100CFU/g）。
（二）倾注平板法
1.将9mL无菌培养基加入无菌平皿，待凝固。
2.加入1mL样品，混匀后倾注培养基。
3.37℃培养24-48小时，观察菌落形态。
（三）显微镜观察
1.制备涂片：滴加生理盐水，涂布均匀。
2.自然干燥或热固定（50-60℃，1分钟）。
3.进行革兰染色（StepbyStep）：
(1)涂片干燥后，滴加结晶紫1分钟。
(2)洗脱多余染液，加碘液1分钟。
(3)洗脱后，加95%酒精脱色30秒。
(4)洗脱酒精，加复染剂（沙弗宁）30秒。
4.在油镜下观察菌体颜色（革兰氏阳性为紫色，阴性为红色）。
四、质量控制要点
（一）阳性对照设置
1.每批次检验需加入已知浓度的标准菌悬液。
2.对照菌生长情况需与样品结果一致。
（二）重复性检验
1.对可疑结果进行二次验证。
2.平行操作误差应低于5%。
（三）操作规范
1.每次接种前后需更换无菌吸头。
2.禁止用手直接接触培养基表面。
五、结果判读与记录
（一）菌落形态观察
1.记录菌落大小、颜色、边缘形状等特征。
2.参照典型菌种图谱进行初步鉴定。
（二）数据记录格式
1.建立电子或纸质记录表，包含样品编号、检验日期、菌落数、操作人等信息。
2.异常数据需标注复核意见。
（三）结果报告
1.按标准格式输出检验结论（如：大肠菌群≤30CFU/g）。
2.附上典型菌落照片或显微照片（如适用）。
一、微生物检验概述
微生物检验是利用微生物学原理和技术，对样品中的微生物进行检测、计数、鉴定和分析的一类实验方法。广泛应用于食品、药品、环境、临床等领域。本指南旨在提供系统的操作技巧，确保检验结果的准确性和可靠性。
二、微生物检验前的准备
（一）环境与设备准备
1.检验环境需符合洁净要求，保持温度（20-28℃）、湿度（45%-60%）稳定。
2.使用超净工作台或生物安全柜，确保无菌操作。
（1）开启设备前，先通入紫外灯照射30分钟消毒。
（2）操作时保持台面整洁，避免物品堆积。
（3）操作结束后，用70%-75%酒精擦拭台面。
3.准备高压灭菌锅、培养箱、显微镜、天平、移液器等核心设备。
（1）高压灭菌锅需定期检查压力表、安全阀，确保密封性。
（2）培养箱需校准温度控制器，误差范围不超过±0.5℃。
（二）试剂与培养基准备
1.常用培养基包括营养琼脂（NA）、麦康凯琼脂（MAC）、血琼脂（BA）等。
（1）营养琼脂适用于通用菌培养，需检测pH值（6.4-7.0）。
（2）麦康凯琼脂用于肠杆菌科分离，需检查结晶紫和胆盐含量。
2.自配培养基需按标准方法灭菌（如高压灭菌121℃，15分钟）。
（1）培养基分装前需用无菌过滤器除菌（0.22μm）。
（2）灭菌后冷却至45℃，加入凝固剂（如琼脂1.5-2.0%）。
3.预先准备无菌生理盐水、蛋白胨水等稀释液。
（1）生理盐水需用三蒸水配制，浓度0.85%。
（2）蛋白胨水用于样品稀释，需检测蛋白胨含量（10g/L）。
（三）样品处理
1.无菌操作取样，避免二次污染。
（1）使用无菌采样勺或手套，避免接触样品表面。
（2）样品量参考标准（如食品：25g，水样：100mL）。
2.食品类样品需用无菌剪刀剪取内部组织。
（1）剪取部位需避开霉变或污染区域。
（2）样品剪成1-2mm小块，均匀铺开。
3.临床样品需用无菌棉签擦拭或吸取。
（1）棉签
文档评论（0）