放射免疫分析技术原理、标记方法及质量评价.pdfVIP

第七章免疫分析

第一节免疫技术

一、基本类型及原理

（一）免疫分析（RIA）以性核素标记抗原与未标记抗原竞争结合特异性抗体，测定样品中抗

原量的一种分析法。

（二）免疫分析（IRMA）用性核素标记的过量抗体与待测抗原直接结合，固相免疫吸附载体

分离结合与游离标记抗体的非竞争免疫分析法。

二、常用的性核素

125131314125

I、I、H、C等，使用最广泛的是I。

三、性标记物及鉴定

（一）原理：以性碘原子置换被标记物分子中酪氨酸或酪胺残基以及组胺残基上的氢原子。蛋白

质、肽类等含有上述基团，可用125Ⅰ直接标记，不含上述基团的甾体激素或药物分子，须连接相应基团才

能用于性碘标记。

（二）标记及类型

1.直接标记法：肽类、蛋白质和酶的碘化标记。常用的方法为：①氯胺T（ch-T）法；②乳过氧化物

酶标记法。

2.间接标记法：也称连接标记法，是最常用的间接碘标记方法。该法主用于甾体类化合物、环核苷酸、

素等缺乏碘标记基团的小分子化合物的标记。

（三）标记物的纯化

1.凝胶过滤法：分子筛机制。

2.离子交换层析法：游离125Ⅰ与标记物分子极性差异进行吸附解离。

3.聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）：按分子所带电荷和直径不同在电场作用下分子迁移速率不同。

4.高效液相色谱法。

（四）标记的鉴定

1.化学纯度：单位标记物中结合于被标记物上的性占总性的百分率，要求＞95%。该参数

还是观察在期内标记物脱碘程度的重要指标。

2.免疫活性：的标记物与抗体结合的能力。

3.比活性：单位化学量标记物中所含的性强度，即每分子被标记物平均所结合性原子数

目。

四、方法学评价

除常规的灵敏度、精密度、准确性、特异性和稳定性等指标外，还应注意以下指标：

（一）可靠性：又称健全性，是评价被测物与品的免疫活性是否相同。借助曲线与样品稀释

曲线的平行性分析来判断。平行性好者可靠。

（二）剂量-反应曲线：通过已知浓度的品和相应的反应参数绘制成剂量-反应曲线，待测物定量

是通过计算其反应参数在剂量-反应曲线上对应的品浓度值而确定。

（三）高剂量钩状效应：标本中被测物浓度超过线性范围上限时，所得结果反而降低或呈的现象。

可以通过选用髙亲和力抗体或对此类标本进行稀释后测定以改善或消除。

Chapter7Radioimmunoassay

Section1Radioimmunoassay

Technology

1.Basictypesandprincip

(1)Radioimmunoassay(RIA)usesradionuclide-labeledtocompetewithunlabeledforbindingtospecificantibodies,anddeterminesthecontentinthesample.抗

Amethodofanalysisoforiginalquantities.(2)Immunoradiationanalysis(IRMA)isanon-competitiveradioimmunoassaythatuses

excessradionuclide-labeledantibodiestodirectlybindtotheantigentobetested,a